Pāriet uz saturu
HEK293 suspension-adapted
Audums
Nieres

Dokumenti

HEK293 suspension-adapted

Cell line · Preces numurs 300686

The HEK293 suspension-adapted cell line is a variant of the human embryonic kidney 293 (HEK293) cells that has been modified to grow in suspension culture...

€500.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

HEK293 suspensijai pielāgotā šūnu līnija ir cilvēka embrionālo nieru 293 (HEK293) šūnu variants, kas ir modificēts, lai augtu suspensijas kultūrā, nevis adherentā kultūrā. Šī pielāgošana ir nozīmīga rūpnieciskiem lietojumiem, kur nepieciešama liela apjoma olbaltumvielu ražošana. Šūnām saglabātas daudzas oriģinālās HEK293 līnijas īpašības, tostarp stabila pārejas transfekcijas efektivitāte un spēja pēc translācijas modificēt ekspresētos proteīnus līdzīgi kā dabiskajās cilvēka šūnās.

Šīs šūnas ir īpaši novērtētas biotehnoloģiju un farmācijas nozarē, lai ražotu rekombinantus proteīnus un vīrusus gēnu terapijai un vakcīnu izstrādei. Pielāgošana suspensijas kultūrai ļauj vieglāk mērogot un vienkāršot novākšanas procesu, padarot to piemērotāku komerciāla mēroga bioprocesiem. HEK293 šūnu līnija, kas pielāgota suspensijai, atbalsta dažādas vīrusu ražošanas sistēmas, tostarp adenovīrusu, lentivīrusu un adenoasociēto vīrusu (AAV), kas ir ļoti svarīgi terapeitiskiem lietojumiem un pētījumiem.

Kopumā HEK293 suspensijas adaptēto šūnu līnija ir svarīgs instruments molekulārās bioloģijas un bioprocesēšanas jomā, nodrošinot daudzpusīgu platformu dažādu bioloģiski aktīvu molekulu ražošanai. Tās vieglā ģenētiskā manipulācija un spēja ražot proteīnus, kas ir pareizi salocīti un pēc translācijas modificēti atbilstoši cilvēka šūnu modeļiem, padara to par neaizstājamu resursu daudzās modernās terapeitiskās un pētniecības jomās.

Audums
Nieres
Pieteikumi
Transfekcijas saimnieks

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atsperes
ĢMO statuss
GMO-S1
Sīkāka informācija par ĢMO statusu
GMO-S1: This suspension-adapted HEK293 cell line contains adenovirus 5-derived E1 sequences from the parental HEK293 line, supporting high proliferative and protein expression capacity. The modification is stably present in transformed embryonic kidney cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Apaļš
Tumorogēns
Plikām pelēm

04Identifikatori

Atsauce
HEK293 suspensijas adaptācija (Cytion kataloga numurs 300686)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_0045

05Pazīmes un uzņēmība

Ekspresētie receptori
Vitronektīns
Proteīnu ekspresija
CEA negatīvs, p53 pozitīvs
Jutība pret vīrusiem
Transformēta ar adenovīrusa 5 DNS adenovīrusa 5 DNS

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
Panserin 293S (PanBiotech, Vācija)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildinājumi nav nepieciešami
Disociācijas reaģents
Nav nepieciešams
Pārstādīšana
Uzturiet suspensijas šūnas šūnu blīvumā no 5 x 105 līdz 2-3 x 106 šūnas/ml Eppendorf šūnu kultūras kolbās uz kratītāja inkubatorā 37 °C/5 % CO2 temperatūrā. Veiciet subkultivāciju, kad šūnu blīvums sasniedzis 2-3 x 106 šūnas/ml. Uzmanīgi atdaliet šūnas, lai izvairītos no to sakopojumiem. Kad šūnu blīvums sasniedzis 1–2 x 106 šūnas/ml, savāc šūnas, centrifugējot 200xg 5 minūtes, un izlej supernatantu. Atšķaidi atbilstošā daudzumā svaigā, iepriekš uzsildītā kultūras vidē un saskaiti šūnas, lai iegūtu informāciju par šūnu dzīvotspēju un skaitu. Savāciet šūnas, centrifugējot 200xg 5 minūtes, un izlejiet supernatantu. Atkārtoti suspendējiet šūnas atbilstošā daudzumā sasaldēšanas barotnes un vēlreiz saskaitiet. Šūnu dzīvotspējai jābūt >>80 %, ieteicamais šūnu blīvums ir 5–10 miljoni šūnu/ml. Pipetējiet šūnas iepriekš marķētās kriovialās. Izmantojiet CoolCell sasaldēšanas konteineru vai kontrolēta ātruma saldētāju, lai nodrošinātu atdzesēšanas ātrumu 1 °C/min.
Sēšanas blīvums
5 x 105 šūnas/ml
Atgūšanās pēc atkusņa
Sāciet kultūras ar blīvumu 5 x 105 šūnas/ml un uzturiet šūnu koncentrāciju līdz 2-3 x 106 šūnas/ml, lai nodrošinātu optimālu augšanu. Inkubējiet 37 °C/5 % CO2 temperatūrā uz šūnu kratītāja 100-150 apgr./min.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni + 10% DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
Auglis