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HEK293 suspension-adapted
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HEK293 suspension-adapted

Cell line · Artikelnummer 300686

The HEK293 suspension-adapted cell line is a variant of the human embryonic kidney 293 (HEK293) cells that has been modified to grow in suspension culture...

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Anpassung / Empfehlungen

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die HEK293-Zelllinie, die an die Suspensionskultur angepasst ist, ist eine Variante der humanen embryonalen Nierenzellen 293 (HEK293), die so modifiziert wurde, dass sie in Suspensionskulturen und nicht in adhärenten Kulturen wächst. Diese Anpassung ist für industrielle Anwendungen von Bedeutung, bei denen eine Proteinproduktion in großem Maßstab erforderlich ist. Die Zellen behalten viele der Eigenschaften der ursprünglichen HEK293-Linie bei, einschließlich einer robusten transienten Transfektionseffizienz und der Fähigkeit, exprimierte Proteine in einer Weise posttranslational zu modifizieren, die derjenigen von nativen menschlichen Zellen ähnelt.

Diese Zellen werden in der Biotechnologie- und Pharmaindustrie für die Produktion rekombinanter Proteine und Viren für die Gentherapie und die Entwicklung von Impfstoffen besonders geschätzt. Die Anpassung an die Suspensionskultur ermöglicht eine leichtere Skalierbarkeit und vereinfacht den Ernteprozess, wodurch sie sich besser für die Bioprozessierung im kommerziellen Maßstab eignet. Die an die Suspensionskultur angepasste HEK293-Zelllinie unterstützt verschiedene virale Produktionssysteme, darunter Adenovirus, Lentivirus und Adeno-assoziiertes Virus (AAV), die für therapeutische Anwendungen und Forschung von zentraler Bedeutung sind.

Insgesamt ist die HEK293-Zelllinie in Suspensionsform ein wichtiges Instrument in den Bereichen Molekularbiologie und Bioprozessierung, das eine vielseitige Plattform für die Produktion verschiedener biologisch aktiver Moleküle bietet. Ihre einfache genetische Manipulation und ihre Fähigkeit, Proteine zu produzieren, die korrekt gefaltet und posttranslational nach menschlichen Zellmustern modifiziert sind, machen sie zu einer unverzichtbaren Ressource in vielen fortgeschrittenen therapeutischen und Forschungsbereichen.

Gewebe
Niere
Anwendungen
Transfektionswirt

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Aussetzung
GVO-Status
GMO-S1
Angaben zum GVO-Status
GMO-S1: This suspension-adapted HEK293 cell line contains adenovirus 5-derived E1 sequences from the parental HEK293 line, supporting high proliferative and protein expression capacity. The modification is stably present in transformed embryonic kidney cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Rund
Tumorauslösend
In Nacktmäusen

04Bezeichner

Quellenangabe
HEK293 Suspensions-adaptiert (Cytion Katalognummer 300686)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_0045

05Expression und Anfälligkeit

Exprimierte Rezeptoren
Vitronectin
Proteinexpression
CEA negativ, p53 positiv
Anfälligkeit für Viren
Transformiert mit Adenovirus 5 DNA Adenovirus 5 DNA

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
Panserin 293S (PanBiotech, Deutschland)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Keine Zuschläge erforderlich
Dissoziationsreagenz
Nicht erforderlich
Subkultivierung
Halten Sie die Suspensionszellen bei einer Zelldichte zwischen 5 x 105 und 2-3 x 106 Zellen/ml in Eppendorf-Zellkulturflaschen auf einem Schüttler in einem Inkubator bei 37 °C/5 % CO2. Führen Sie eine Subkultur durch, sobald die Zelldichte 2-3 x 106 Zellen/ml erreicht hat. Lösen Sie die Zellen vorsichtig, um Klumpenbildung zu vermeiden. Sobald eine Zelldichte von 1–2 × 106 Zellen/ml erreicht ist, die Zellen durch 5-minütiges Zentrifugieren bei 200 × g sammeln und den Überstand verwerfen. In einem geeigneten Volumen frischem, vorgewärmtem Kulturmedium verdünnen und die Zellen zählen, um Informationen über die Lebensfähigkeit und Anzahl der Zellen zu erhalten. Sammeln Sie die Zellen durch Zentrifugieren bei 200 x g für 5 Minuten und entsorgen Sie den Überstand. Resuspendieren Sie die Zellen in einer geeigneten Menge Gefriermedium und zählen Sie sie erneut. Die Lebensfähigkeit der Zellen sollte >>80 % betragen, eine Zelldichte von 5–10 Millionen Zellen/ml wird empfohlen. Pipettieren Sie die Zellen in vorbeschriftete Kryoröhrchen. Verwenden Sie entweder einen CoolCell-Gefrierbehälter oder einen Gefrierschrank mit kontrollierter Abkühlgeschwindigkeit, um eine Abkühlgeschwindigkeit von 1 °C/min sicherzustellen.
Aussaatdichte
5 x 105 Zellen/ml
Erholung nach dem Auftauen
Starten Sie die Kulturen mit einer Dichte von 5 x 105 Zellen/ml und halten Sie die Zellkonzentration für ein optimales Wachstum bei 2-3 x 106 Zellen/ml. Inkubieren Sie bei 37 °C/5 % CO2 auf einem Zellschüttler bei 100-150 U/min.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir vollständiges Wachstumsmedium + 10 % DMSO, um eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen zu gewährleisten.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
Fötus