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HEK293 EBNA-Zellen
Gewebe
Embryonale Niere
Synonyme
HEK293-EBNA, 293 c18, 293c18, HEK 293 c18, HEK-293 c18, HEK293-EBNA1, HEK-293-EBNA, HEK 293-EBNA, HEK 293 EBNA, HEK293EBNA, 293 EBNA, 293-EBNA1, 293-EBNA, 293/EBNA, 293EBNA, EBNA-293, EBNA293, HEK293E, HEK/EBNA, HEK-EBNA, HEK.EBNA, 293/EBNA-1, 298E

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HEK293 EBNA-Zellen

Cell line · Artikelnummer 300264

Die HEK293-EBNA-Zelllinie ist eine Ableitung der ursprünglichen HEK293-Linie, die ihrerseits aus menschlichen embryonalen Nierenzellen stammt, die in Gewebekultur gezüchtet wurden....

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die HEK293 EBNA-Zelllinie ist ein Derivat der ursprünglichen HEK293-Linie, die ihrerseits von in Gewebekultur gezüchteten menschlichen embryonalen Nierenzellen abstammt. Diese spezielle Unterlinie wurde so manipuliert, dass sie das Epstein-Barr-Virus-Kernantigen-1 (EBNA-1) stabil exprimiert. Die Expression von EBNA-1 ermöglicht die episomale Replikation von Plasmiden, die den EBV-Replikationsursprung tragen, was HEK293 EBNA-Zellen besonders wertvoll für die Produktion rekombinanter Proteine und für Genexpressionsstudien mit episomalen Vektoren macht.

HEK293 EBNA-Zellen behalten viele der Eigenschaften der HEK293-Elternzellen bei, einschließlich ihrer Adhärenz an Zellkulturplastik und ihres robusten Wachstums in Standard-Säugetierzellkulturmedien. Der Zusatz von EBNA-1 erweitert ihren Nutzen in der Forschung und für biotechnologische Anwendungen, da er die Fähigkeit der Zellen zur Vermehrung von Plasmiden mit dem EBV-Ursprung der Plasmidreplikation verbessert. Diese Eigenschaft ist entscheidend für die Herstellung stabiler, ertragreicher rekombinanter Proteine, die sowohl für Forschungszwecke als auch für die industrielle Produktion unerlässlich sind.

Gewebe
Embryonale Niere
Synonyme
  • HEK293-EBNA
  • 293 c18
  • 293c18
  • HEK 293 c18
  • HEK-293 c18
  • HEK293-EBNA1
  • HEK-293-EBNA
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  • EBNA-293
  • EBNA293
  • HEK293E
  • HEK/EBNA
  • HEK-EBNA
  • HEK.EBNA
  • 293/EBNA-1
  • 298E

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
GVO-Status
GMO-S1
Angaben zum GVO-Status
GMO-S1: This HEK293 EBNA cell line contains EBV nuclear antigen (EBNA) sequences enabling episomal replication of EBV-derived plasmids, without releasing infectious virus particles. The modification is stably present in embryonic kidney-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologische Sicherheitsstufe
2

03Merkmale

Morphologie
Epithelial

04Bezeichner

Quellenangabe
HEK293 EBNA (Cytion Katalognummer 300264)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_6974

05Expression und Anfälligkeit

Antigenexpression
EBNA1
Viren
Adenovirus 5 (Transformant), EBV (exprimiert EBNA1)

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
Fötus