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HEK293-F-Zellen
Gewebe
Niere
Synonyme
HEK-293-F, HEK 293-F, HEK-293F, HEK293F, 293-F, 293 F, 293F

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HEK293-F-Zellen

Cell line · Artikelnummer 300260

HEK293-F-Zellen sind eine schnell wachsende, sehr gut transfizierbare Sublinie, die aus der menschlichen embryonalen Nierenzelllinie 293 (HEK293) abgeleitet wurde. Die Bezeichnung „F“ steht für...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

HEK293-F-Zellen sind eine schnell wachsende, hoch transfizierbare Unterlinie, die von der humanen embryonalen Nierenzelllinie 293 (HEK293) abgeleitet ist. Die Bezeichnung "F" weist darauf hin, dass diese Zellen für das Wachstum in Suspensionskulturen angepasst wurden, was sie für die Proteinproduktion in großem Maßstab besonders geeignet macht. Die Zellen wachsen in einer Vielzahl von serumfreien Medien und ermöglichen so skalierbare Prozesse in biotechnologischen und pharmazeutischen Anwendungen. HEK293-F-Zellen behalten die epithelähnliche Morphologie der HEK293-Stammlinie bei und werden in Suspension gehalten, ohne dass sie an ein festes Substrat gebunden werden müssen.

Diese Zellen sind hocheffizient bei der Expression rekombinanter Proteine und werden häufig für die Herstellung viraler Vektoren für die Gentherapie verwendet, einschließlich adenoviraler, lentiviraler und retroviraler Vektoren. Ihr robustes Wachstum in Suspension und ihre einfache Transfektion machen sie ideal für den Einsatz in transienten Transfektionsprotokollen, wo sie innerhalb weniger Tage nach der Transfektion hohe Proteinausbeuten produzieren können. Diese Eigenschaft ist entscheidend für schnelle Produktionszyklen in Forschung und Industrie. Die Anpassungsfähigkeit von HEK293-F-Zellen an verschiedene Wachstumsbedingungen und ihre Fähigkeit zur Kultivierung in hoher Dichte erhöhen ihren Nutzen in Bioprozessumgebungen.

Gewebe
Niere
Anwendungen
Transfektionswirt
Synonyme
  • HEK-293-F
  • HEK 293-F
  • HEK-293F
  • HEK293F
  • 293-F
  • 293 F
  • 293F

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Aussetzung
GVO-Status
GMO-S1
Angaben zum GVO-Status
GMO-S1: This HEK293-F cell line contains SV40, enabling high transfection efficiency and robust growth in suspension culture. The modification is stably present in embryonic kidney cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Tumorauslösend
In Nacktmäusen
Verdopplungszeit
30 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
HEK293-F (Cytion Katalognummer 300260)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_6642

05Expression und Anfälligkeit

Exprimierte Rezeptoren
Vitronectin
Proteinexpression
CEA negativ, p53 positiv
Viren
Transformiert mit Adenovirus 5 DNA Adenovirus 5 DNA

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
CD293 (Thermo)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
1 x 104 Zellen/cm² ergeben in etwa 4 Tagen eine konfluente Schicht.
Flüssigkeitswechsel
2 Mal pro Woche
Erholung nach dem Auftauen
Nach dem Auftauen die Zellen mit einer Dichte von 5 x 104 Zellen/cm² ausplattieren und die Zellen mindestens 24 Stunden lang vom Gefrierprozess erholen und adhärieren lassen.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
Fötus