Siirry sisältöön
HEK293-F-solut
Kudos
Munuaiset
Synonyymit
HEK-293-F, HEK 293-F, HEK-293F, HEK293F, 293-F, 293 F, 293F

Asiakirjat

HEK293-F-solut

Cell line · Tuotenumero 300260

HEK293-F-solut ovat nopeasti kasvava, erittäin helposti transfektoitava alalinja, joka on johdettu ihmisen alkion munuaisista peräisin olevasta 293 (HEK293) -solulinjasta. Merkintä ”F” tarkoittaa...

€430.00ilman veroja ja toimituskuluja

Räätälöinti / Suositukset

Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

HEK293-F-solut ovat nopeasti kasvava, hyvin transfektoituva alalinja, joka on johdettu ihmisen alkion munuaisten 293-solulinjasta (HEK293). F-merkintä osoittaa, että nämä solut on mukautettu kasvamaan suspensioviljelmissä, mikä tekee niistä erityisen käyttökelpoisia suuren mittakaavan proteiinituotannossa. Solut kasvavat erilaisissa seerumittomissa väliaineissa, mikä helpottaa skaalautuvia prosesseja bioteknologisissa ja farmaseuttisissa sovelluksissa. HEK293-F-solut säilyttävät HEK293-alkuperälinjan epiteelin kaltaisen morfologian, ja ne säilyvät suspensiossa ilman tarvetta kiinnittyä kiinteään substraattiin.

Nämä solut ilmentävät erittäin tehokkaasti rekombinanttiproteiineja, ja niitä hyödynnetään laajalti geeniterapiassa käytettävien virusvektoreiden, kuten adenovirus-, lentivirus- ja retrovirusvektoreiden, tuotannossa. Niiden vankka kasvu suspensiossa ja transfektion helppous tekevät niistä ihanteellisia käytettäväksi ohimenevissä transfektioprotokollissa, joissa ne voivat tuottaa suuria proteiinisatoja muutamassa päivässä transfektion jälkeen. Tämä ominaisuus on kriittinen nopeille tuotantosykleille tutkimuksessa ja teollisuudessa. HEK293-F-solujen sopeutumiskyky erilaisiin kasvuolosuhteisiin ja niiden kyky kasvattaa soluja suurella tiheydellä parantavat niiden käyttökelpoisuutta bioprosessointiympäristöissä.

Kudos
Munuaiset
Sovellukset
Transfektion isäntä
Synonyymit
  • HEK-293-F
  • HEK 293-F
  • HEK-293F
  • HEK293F
  • 293-F
  • 293 F
  • 293F

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Jousitus
GMO-status
GMO-S1
GMO-statuksen tiedot
GMO-S1: This HEK293-F cell line contains SV40, enabling high transfection efficiency and robust growth in suspension culture. The modification is stably present in embryonic kidney cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen
Kasvaimia aiheuttava
Alastomilla hiirillä
Kaksinkertaistumisaika
30 tuntia

04Tunnisteet

Lähdeviite
HEK293-F (Cytionin luettelonumero 300260)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_6642

05Ilmentyminen ja alttius

Ilmentyvät reseptorit
Vitronektiini
Proteiinin ilmentyminen
CEA negatiivinen, p53 positiivinen
Virukset
Muunnettu adenovirus 5 DNA:lla adenovirus 5 DNA:lla

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
CD293 (Thermo)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Kylvötiheys
1 x 104 solua/cm2 tuottaa konfluenttisen kerroksen noin 4 päivässä.
Nesteen uusiminen
2 kertaa viikossa
Sulamisen jälkeinen palautuminen
Sulattamisen jälkeen levitä solut 5 x 104 solua/cm2 ja anna solujen toipua pakastusprosessista ja kiinnittyä vähintään 24 tunnin ajan.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
Sikiö