Mine otse sisu juurde
HEK293-F rakud
Kude
Neerud
Sünonüümid
HEK-293-F, HEK 293-F, HEK-293F, HEK293F, 293-F, 293 F, 293F

Dokumendid

HEK293-F rakud

Cell line · Toote number 300260

HEK293-F rakud on kiiresti kasvav, hästi transfekteeritav alaliin, mis on saadud inimese embrüonaalsest neeru 293 (HEK293) rakuliinist. Tähis „F“ tähistab...

€430.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

Kohandamine / Soovitused

Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

HEK293-F rakud on inimese embrüonaalse neeru 293 (HEK293) rakuliinist saadud kiiresti kasvav, hästi transfitseeritav alaliin. Tähistus "F" näitab, et need rakud on kohandatud kasvamiseks suspensioonikultuurides, mis muudab need eriti kasulikuks suuremahuliseks valkude tootmiseks. Rakud kasvavad mitmesugustes seerumivabades keskkondades, mis hõlbustab biotehnoloogilistes ja farmaatsiatööstuslikes rakendustes kasutatavaid skaleeritavaid protsesse. HEK293-F rakud säilitavad algse HEK293 liini epiteelilaadse morfoloogia ja neid hoitakse suspensioonis, ilma et neid oleks vaja kinnitada tahke substraadi külge.

Need rakud on väga tõhusad rekombinantsete valkude ekspresseerimisel ja neid kasutatakse laialdaselt geeniteraapia viirusvektorite, sealhulgas adenoviirus-, lentiviirus- ja retroviirusvektorite tootmisel. Nende tugev kasv suspensioonis ja lihtne transfektsioon muudavad nad ideaalseks kasutamiseks transientse transfektsiooni protokollides, kus nad suudavad toota suure valgu saagise mõne päeva jooksul pärast transfektsiooni. See omadus on kriitilise tähtsusega kiirete tootmistsüklite jaoks teadusuuringutes ja tööstuslikes tingimustes. HEK293-F rakkude kohanemisvõime erinevate kasvutingimustega ja nende võime kasvatada suure tihedusega rakke suurendavad nende kasulikkust biotöötluskeskkondades.

Kude
Neerud
Rakendused
Transfektsiooni peremees
Sünonüümid
  • HEK-293-F
  • HEK 293-F
  • HEK-293F
  • HEK293F
  • 293-F
  • 293 F
  • 293F

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Naine
Kasvuvõime
Vedrustus
GMO-staatus
GMO-S1
GMO-staatuse üksikasjad
GMO-S1: This HEK293-F cell line contains SV40, enabling high transfection efficiency and robust growth in suspension culture. The modification is stably present in embryonic kidney cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed
Tuumorigeenne
Alasti hiirtel
Kahekordistumisaeg
30 tundi

04Tunnused

Viide
HEK293-F (Cytioni katalooginumber 300260)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_6642

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Ekspresseeritud retseptorid
Vitronektiin
Valgu ekspressioon
CEA negatiivne, p53 positiivne
Viirused
Transformeeritud adenoviiruse 5 DNAga adenoviiruse 5 DNAga

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
CD293 (Thermo)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külvitihedus
1 x 104 rakku/cm2 moodustab umbes 4 päeva jooksul konfluentse kihi.
Vedeliku vahetus
2 korda nädalas
Taastumine pärast sulamist
Pärast sulatamist asetage rakud plaadile tihedusega 5 x 104 rakku/cm2 ja laske rakkudel külmutamisprotsessist taastuda ja kinnituda vähemalt 24 tunni jooksul.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
Loote