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Células HEK293-F
Tecido
Rim
Sinónimos
HEK-293-F, HEK 293-F, HEK-293F, HEK293F, 293-F, 293 F, 293F

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Células HEK293-F

Cell line · Número do produto 300260

As células HEK293-F são uma sublinha de crescimento rápido e altamente transfectável, derivada da linha celular renal embrionária humana 293 (HEK293). A designação «F» indica...

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01Informações gerais

Descrição

As células HEK293-F são uma sub-linha de crescimento rápido e altamente transfectável derivada da linha de células 293 do rim embrionário humano (HEK293). A designação "F" indica que estas células foram adaptadas para crescimento em culturas em suspensão, o que as torna particularmente úteis para a produção de proteínas em grande escala. As células crescem numa variedade de meios sem soro, facilitando processos escaláveis em aplicações biotecnológicas e farmacêuticas. As células HEK293-F mantêm a morfologia epitelial da linha HEK293 original e são mantidas em suspensão sem a necessidade de fixação a um substrato sólido.

Estas células são altamente eficientes na expressão de proteínas recombinantes e são amplamente utilizadas na produção de vectores virais para terapia genética, incluindo vectores adenovirais, lentivirais e retrovirais. O seu crescimento robusto em suspensão e a facilidade de transfecção tornam-nos ideais para utilização em protocolos de transfecção transiente, onde podem produzir elevados rendimentos de proteínas em poucos dias após a transfecção. Esta caraterística é fundamental para ciclos de produção rápidos em ambientes de investigação e industriais. A adaptabilidade das células HEK293-F a várias condições de crescimento e a sua capacidade de cultura de alta densidade aumentam a sua utilidade em ambientes de bioprocessamento.

Tecido
Rim
Aplicações
Hospedeiro de transfecção
Sinónimos
  • HEK-293-F
  • HEK 293-F
  • HEK-293F
  • HEK293F
  • 293-F
  • 293 F
  • 293F

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Suspensão
Estatuto em matéria de OGM
GMO-S1
Detalhes sobre o estatuto dos OGM
GMO-S1: This HEK293-F cell line contains SV40, enabling high transfection efficiency and robust growth in suspension culture. The modification is stably present in embryonic kidney cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tumorigénico
Em ratinhos nus
Tempo de duplicação
30 horas

04Identificadores

Referência
HEK293-F (número de catálogo Cytion 300260)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_6642

05Expressão e suscetibilidade

Receptores expressos
Vitronectina
Expressão proteica
CEA negativo, p53 positivo
Vírus
Transformado com ADN do adenovírus 5 ADN do adenovírus 5

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
CD293 (Thermo)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
1 x 104 células/cm² produzirá uma camada confluente em cerca de 4 dias
Renovação de fluidos
2 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
Após o descongelamento, coloque as células em placas a uma densidade de 5 x 104 células/cm² e deixe-as recuperar do processo de congelamento e aderir durante pelo menos 24 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
Feto