Przejdź do treści
HEK293 suspension-adapted
Chusteczka
Nerka

Dokumenty

HEK293 suspension-adapted

Cell line · Numer produktu 300686

The HEK293 suspension-adapted cell line is a variant of the human embryonic kidney 293 (HEK293) cells that has been modified to grow in suspension culture...

€500.00bez podatku i kosztów wysyłki

Dostosowanie / Zalecenia

W magazynie
Lot
Polecane (najświeższa partia)
1

01Informacje ogólne

Opis

Linia komórkowa HEK293 przystosowana do hodowli w zawiesinie jest wariantem komórek ludzkiej embrionalnej nerki 293 (HEK293), które zostały zmodyfikowane tak, aby rosły w hodowli w zawiesinie, a nie w hodowli adherentnej. Adaptacja ta jest istotna dla zastosowań przemysłowych, w których wymagana jest produkcja białek na dużą skalę. Komórki zachowują wiele cech oryginalnej linii HEK293, w tym wysoką wydajność przejściowej transfekcji i zdolność do potranslacyjnej modyfikacji wyrażonych białek w sposób podobny do natywnych komórek ludzkich.

Komórki te są szczególnie cenione w przemyśle biotechnologicznym i farmaceutycznym do produkcji rekombinowanych białek i wirusów do terapii genowej i rozwoju szczepionek. Adaptacja do hodowli zawiesinowej pozwala na łatwiejszą skalowalność i upraszcza proces zbioru, dzięki czemu jest bardziej odpowiednia do bioprzetwarzania na skalę komercyjną. Linia komórkowa HEK293 przystosowana do hodowli w zawiesinie obsługuje różne systemy produkcji wirusów, w tym adenowirusy, lentiwirusy i adenowirusy (AAV), które mają kluczowe znaczenie w zastosowaniach terapeutycznych i badaniach.

Ogólnie rzecz biorąc, linia komórkowa HEK293 jest kluczowym narzędziem w dziedzinie biologii molekularnej i bioprzetwarzania, zapewniając wszechstronną platformę do produkcji różnych biologicznie aktywnych cząsteczek. Łatwość manipulacji genetycznej i zdolność do produkcji białek, które są prawidłowo składane i modyfikowane potranslacyjnie zgodnie z wzorcami ludzkich komórek, czynią ją niezbędnym zasobem w wielu zaawansowanych środowiskach terapeutycznych i badawczych.

Chusteczka
Nerka
Zastosowania
Host transfekcji

02Klasyfikacja

Organizm
Człowiek
Seks
Kobieta
Właściwości związane ze wzrostem
Zawieszenie
Status GMO
GMO-S1
Szczegółowe informacje dotyczące statusu GMO
GMO-S1: This suspension-adapted HEK293 cell line contains adenovirus 5-derived E1 sequences from the parental HEK293 line, supporting high proliferative and protein expression capacity. The modification is stably present in transformed embryonic kidney cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Poziom bezpieczeństwa biologicznego
1

03Cechy charakterystyczne

Morfologia
Okrągły
Nowotworotwórczy
U nagich myszy

04Identyfikatory

Źródło
HEK293 dostosowany do zawiesiny (numer katalogowy Cytion 300686)
Numer identyfikacji podatkowej NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0045

05Ekspresja i podatność

Receptory ulegające ekspresji
Witronektyna
Ekspresja białek
CEA ujemny, p53 dodatni
Podatność na wirusy
Transformowany adenowirusem 5 DNA adenowirus 5 DNA

06Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana
Panserin 293S (PanBiotech, Niemcy)
Atmosfera inkubacyjna

37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy
Nie są wymagane żadne suplementy
Odczynnik dysocjacyjny
Niewymagane
Hodowla komórek w subkulturze
Utrzymuj komórki w zawiesinie w gęstości od 5 x 105 do 2-3 x 106 komórek/ml w kolbach do hodowli komórek Eppendorf na wytrząsarce w inkubatorze w temperaturze 37°C/5% CO2. Po osiągnięciu gęstości komórek wynoszącej 2-3 x 106 komórek/ml należy wykonać subkulturę. Ostrożnie usuwaj komórki, aby uniknąć tworzenia się skupisk. Po osiągnięciu gęstości komórek wynoszącej 1-2 x 106 komórek/ml, zebrać komórki przez odwirowanie przy 200xg przez 5 minut i odrzucić supernatant. Rozcieńczyć w odpowiedniej objętości świeżego, podgrzanego podłoża hodowlanego i policzyć komórki, aby uzyskać informacje na temat żywotności i liczby komórek. Zbierz komórki przez odwirowanie przy 200xg przez 5 minut i odrzuć supernatant. Ponownie zawiesić komórki w odpowiedniej objętości pożywki do zamrażania i ponownie policzyć. Żywotność komórek powinna wynosić >>80%, zalecana gęstość komórek to 5–10 milionów komórek/ml. Przenieść komórki pipetą do wstępnie oznaczonych probówek kriogenicznych. Użyć pojemnika do zamrażania CoolCell lub zamrażarki o kontrolowanej prędkości, aby zapewnić prędkość chłodzenia wynoszącą 1°C/min.
Gęstość wysiewu
5 x 105 komórek/ml
Powrót do stanu sprzed rozmrożenia
Rozpocznij hodowlę przy gęstości 5 x 105 komórek/ml i utrzymuj stężenie komórek na poziomie 2-3 x 106 komórek/ml, aby uzyskać optymalny wzrost. Inkubuj w temperaturze 37°C/5% CO2 na wytrząsarce komórkowej przy 100-150 obr./min.
Rozmrażanie i hodowla
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

07Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania
Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu.
Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

08Darczyńca

Wiek dawcy
Płód