Komórki HEK293

Linia komórkowa HEK293, unieśmiertelniona linia komórek nabłonkowych uzyskana z ludzkich embrionalnych komórek nerkowych w latach siedemdziesiątych XX wieku przez Alexa van der Eba na Uniwersytecie w Utrechcie, stała się kluczowym modelem eksperymentalnym w biologii molekularnej i zastosowaniach biotechnologicznych ze względu na jej niezwykłą wszechstronność i łatwość manipulacji genetycznych.

Transformacja linii komórkowej HEK293 polegała na integracji określonego segmentu DNA adenowirusa 5, osadzając geny adenowirusowe E1A i E1B w genomie komórkowym. Modyfikacja adenowirusowego DNA umożliwiła liniom komórkowym efektywne pobieranie obcego DNA, co znane jest jako wysoka wydajność transfekcji. Integracja wirusowego DNA z genomem komórek HEK293 spowodowała unieśmiertelnienie komórek i znacznie zwiększyła użyteczność tych komórek w zastosowaniach biotechnologicznych, ułatwiając stabilne włączenie i ekspresję egzogennego DNA, proces określany jako stabilna transfekcja. Zdolność ta pozwala na trwałą obecność i funkcjonowanie obcych genów w komórkach, czyniąc HEK293 nieocenionym narzędziem do badań genetycznych i biotechnologii.

W rezultacie komórki HEK293 stały się podstawowym zasobem w biotechnologii do produkcji rekombinowanych białek, w tym ważnych białek terapeutycznych, i służą jako solidne komórki gospodarza do generowania wektorów wirusowych, w szczególności wektorów adenowirusowych i lentiwirusowych. Komórki HEK 293 odgrywają kluczową rolę w przemyśle farmaceutycznym w wysokoprzepustowych testach przesiewowych, produkcji terapii genowych ukierunkowanych na określone geny związane z zaburzeniami pojedynczych genów oraz w badaniach infekcji adenowirusowych.

W biotechnologii przemysłowej użyteczność ludzkiej linii komórkowej HEK293 rozciąga się na produkcję enzymów rekombinowanych, produkcję wektorów wirusowych, takich jak wektory adenowirusowe, produkcję białek i rozwój biosensorów. Badania toksykologiczne czerpią korzyści z zastosowania linii komórkowej HEK w ocenie wpływu substancji chemicznych na biologię komórek, w tym wpływu na typowe komórki nerek i potencjału terapii genowych. Zdolność nieśmiertelnej linii komórkowej HEK293 do wydajnego wytwarzania natywnych białek podkreśla ich istotną rolę w badaniach medycznych, w tym w badaniach nad rakiem i odkrywaniu podstaw terapii genowej.

Komórki HEK293 oferują unikalną platformę do badania biologii komórek i interesujących białek, przewyższając inne linie komórkowe pod względem wszechstronności i użyteczności zarówno w badaniach, jak i zastosowaniach przemysłowych. Dla porównania, komórki HEK293T, wariant HEK293, są modyfikowane w celu zwiększenia wydajności transfekcji, komórki HEK293F są przystosowane do hodowli zawiesinowej w celu ułatwienia produkcji białek na dużą skalę, a inne linie komórkowe ssaków, takie jak komórki Vero, pochodzące z tkanki nerki małpy, są wykorzystywane głównie do opracowywania szczepionek i badań wirusologicznych.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym