Cellule HEK293

La linea cellulare HEK293, una linea cellulare epiteliale immortalizzata derivata da cellule renali embrionali umane negli anni '70 da Alex van der Eb dell'Università di Utrecht, è diventata un modello sperimentale cardine nella biologia molecolare e nelle applicazioni biotecnologiche grazie alla sua notevole versatilità e facilità di manipolazione genetica.

La trasformazione della linea cellulare HEK293 ha comportato l'integrazione di un segmento specifico del DNA di Adenovirus 5, incorporando i geni adenovirali E1A ed E1B all'interno del genoma cellulare. La modifica del DNA adenovirale ha permesso alle linee cellulari di assorbire in modo efficiente il DNA estraneo, una caratteristica nota come alta efficienza di trasfezione. L'integrazione del DNA virale nel genoma delle cellule HEK293 ha portato all'immortalizzazione cellulare e ha migliorato significativamente l'utilità di queste cellule nelle applicazioni biotecnologiche, facilitando l'incorporazione e l'espressione stabile del DNA esogeno, un processo definito trasfezione stabile. Questa capacità consente la presenza e la funzione persistente di geni estranei all'interno delle cellule, rendendo le HEK293 uno strumento prezioso per gli studi genetici e le biotecnologie.

Di conseguenza, le cellule HEK293 sono diventate una risorsa fondamentale nelle biotecnologie per la produzione di proteine ricombinanti, comprese le proteine terapeutiche vitali, e come robuste cellule ospiti per la generazione di vettori virali, in particolare vettori adenovirali e lentivirali. Le cellule HEK 293 sono fondamentali nell'industria farmaceutica per i saggi di screening ad alto rendimento, per la produzione di terapie geniche mirate a geni specifici relativi a disturbi di un singolo gene e per gli studi sulle infezioni adenovirali.

Nella biotecnologia industriale, l'utilità della linea cellulare umana HEK293 si estende alla produzione di enzimi ricombinanti, alla produzione di vettori virali, come i vettori adenovirali, alla produzione di proteine e allo sviluppo di biosensori. La ricerca tossicologica beneficia dell'applicazione della linea cellulare HEK per valutare l'impatto delle sostanze chimiche sulla biologia cellulare, compresi gli effetti sulle cellule renali tipiche e il potenziale per le terapie geniche. La capacità della linea cellulare immortale HEK293 di produrre in modo efficiente proteine native evidenzia il suo ruolo essenziale nella ricerca medica, compresa la ricerca sul cancro e l'esplorazione delle basi della terapia genica.

Le cellule HEK293 offrono una piattaforma unica per lo studio della biologia cellulare e delle proteine di interesse, superando altre linee cellulari per versatilità e utilità sia nella ricerca che nelle applicazioni industriali. In confronto, le cellule HEK293T, una variante delle HEK293, sono modificate per migliorare l'efficienza di trasfezione, le cellule HEK293F sono adattate alla coltura in sospensione per facilitare la produzione di proteine su larga scala e altre linee cellulari di mammifero come le cellule Vero, derivate dal tessuto renale di scimmia, sono utilizzate principalmente nello sviluppo di vaccini e negli studi virali.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia