HEK293-celler

HEK293-cellelinjen, en udødelig epitelcellelinje som ble avledet fra humane embryonale nyreceller på 1970-tallet av Alex van der Eb ved universitetet i Utrecht, har blitt en sentral eksperimentell modell innen molekylærbiologi og bioteknologiske anvendelser på grunn av sin bemerkelsesverdige allsidighet og enkle genetiske manipulering.

Transformasjonen av HEK293-cellelinjen involverte integrering av et spesifikt segment fra Adenovirus 5-DNA, der de adenovirale E1A- og E1B-genene ble integrert i cellens genom. Den adenovirale DNA-modifiseringen gjorde cellelinjene i stand til å ta opp fremmed DNA på en effektiv måte, noe som kalles høy transfeksjonseffektivitet. Integrasjonen av viralt DNA i HEK293-cellenes genom resulterte i udødeliggjøring av cellene, noe som i betydelig grad forbedret bruken av disse cellene i bioteknologiske anvendelser ved å legge til rette for stabil inkorporering og uttrykk av eksogent DNA, en prosess som kalles stabil transfeksjon. Denne egenskapen gjør det mulig å opprettholde tilstedeværelse og funksjon av fremmede gener i cellene, noe som gjør HEK293 til et uvurderlig verktøy for genetiske studier og bioteknologi.

HEK293-celler har derfor blitt en grunnleggende ressurs innen bioteknologi for produksjon av rekombinante proteiner, inkludert viktige terapeutiske proteiner, og som robuste vertsceller for generering av virusvektorer, særlig adenovirale og lentivirale vektorer. HEK 293-celler er sentrale i legemiddelindustrien når det gjelder screeninganalyser med høy gjennomstrømning, produksjon av genterapier rettet mot spesifikke gener knyttet til enkeltgensykdommer og studier av adenoviral infeksjon.

Innenfor industriell bioteknologi brukes den humane cellelinjen HEK293 også til produksjon av rekombinante enzymer, produksjon av virale vektorer, for eksempel adenovirale vektorer, proteinproduksjon og utvikling av biosensorer. Toksikologisk forskning drar nytte av HEK-cellelinjen når det gjelder å vurdere kjemikaliers innvirkning på cellebiologien, inkludert effekten på typiske nyreceller og potensialet for genterapier. Den udødelige cellelinjen HEK293s evne til effektivt å produsere native proteiner understreker cellelinjens viktige rolle i medisinsk forskning, inkludert kreftforskning og utforsking av grunnlaget for genterapi.

HEK293-celler utgjør en unik plattform for studier av cellebiologi og proteiner av interesse, og overgår andre cellelinjer i allsidighet og anvendelighet i både forskning og industri. Til sammenligning er HEK293T-celler, en variant av HEK293, modifisert for å øke transfeksjonseffektiviteten, HEK293F-celler er tilpasset suspensjonskultur for å legge til rette for proteinproduksjon i stor skala, og andre pattedyrcellelinjer som Vero-celler, som stammer fra nyrevev fra aper, brukes primært til vaksineutvikling og virusstudier.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring