HEK293T-celler

HEK 293T, et svært transfekterbart derivat av foreldrecellen HEK 293, fremstår som et allsidig og kraftig verktøy innen bioteknologi for produksjon av rekombinante proteiner og ulike typer vaksiner.

HEK-293T-celler ble generert ved å transfektere 293-celler fra embryonale nyrer med et plasmid som koder for SV40 large T-antigenet. Den opprinnelige HEK293-cellelinjen ble utviklet fra epitelceller fra humant embryonalt nyrevev, og transformasjonen skjedde i det som var det 293. eksperimentet som forskerne utførte.

Når det gjelder vaksineutvikling, er 293T embryonale nyreceller sentrale for produksjon av virusvektorer, inkludert adenovirusvektorer. HEK293T-celler transfekteres under spesifikke dyrkingsforhold med vektorer som bærer adenovirale og retrovirale elementer, inkludert SV40-replikasjonsopphavet, noe som fører til produksjon av viruslignende partikler (VLP-er).

VLP-ene, som er blottet for viralt genetisk materiale, er nøkkelen til å danne grunnlaget for subenhets- og VLP-baserte vaksiner. Produksjonen av rekombinante proteiner i 293T-celler foregår ved hjelp av ulike transfeksjonsmetoder, med hovedvekt på produksjon av AP-fusjonsproteiner og andre proteintyper som utgjør den antigene komponenten i vaksiner.

293T-cellelinjens genomtekniske egenskaper gjør det mulig å skreddersy ekspresjonskonstruksjoner, noe som ytterligere øker produksjonen av virusvektorer. Dette, kombinert med muligheten til å produsere proteiner i suspensjonskultur eller under adherente forhold, gjør 293T-cellelinjen til en fullverdig løsning for moderne vaksineutvikling.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring