HEK293T-celler

HEK 293T, ett mycket transfekterbart derivat av föräldracellen HEK 293, framstår som ett mångsidigt och kraftfullt verktyg inom bioteknikområdet för produktion av rekombinanta proteiner och olika typer av vacciner.

HEK-293T-celler genererades genom transfektion av 293-celler från embryonala njurar med en plasmid som kodar för SV40 Large T-antigen. Den ursprungliga HEK293-cellinjen utvecklades från epitelceller från mänsklig embryonal njurvävnad, och omvandlingen skedde i det 293:e experimentet som forskarna genomförde.

När det gäller vaccinutveckling är de embryonala 293T-njurcellerna centrala för produktion av virusvektorer, inklusive adenovirusvektorer. HEK293T-celler transfekteras under specifika odlingsförhållanden med vektorer som bär på adenovirala och retrovirala element, inklusive SV40-replikationsursprunget, vilket leder till produktion av virusliknande partiklar (VLP).

VLP:erna, som saknar viralt genetiskt material, är viktiga för att utgöra grunden för subenhets- och VLP-baserade vacciner. Produktionen av rekombinanta proteiner i 293T-celler underlättas av olika transfektionsmetoder, med tonvikt på generering av AP-fusionsproteiner och andra typer av proteiner som utgör den antigena komponenten i vacciner.

293T-cellinjens förmåga till genome engineering gör det möjligt att skräddarsy expressionskonstruktioner, vilket ytterligare ökar produktionen av virala vektorer. Detta, i kombination med förmågan att producera proteiner i suspensionskultur eller under adherenta förhållanden, gör 293T-cellinjen till en komplett lösning för modern vaccinutveckling.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring