Células HEK293T

A HEK 293T, uma variante altamente transfectável da célula parental HEK 293, destaca-se como uma ferramenta versátil e poderosa no campo da biotecnologia para a produção de proteínas recombinantes e diversos tipos de vacinas.

As células HEK-293T foram geradas por meio da transfecção de células renais embrionárias 293 com um plasmídeo que codifica o antígeno T grande do SV40. A linhagem celular HEK-293 original foi desenvolvida a partir de células epiteliais de tecido renal embrionário humano, tendo sua transformação ocorrido justamente na 293ª experiência realizada pelos pesquisadores.

No âmbito do desenvolvimento de vacinas, as células renais embrionárias 293T são fundamentais para a produção de vetores virais, incluindo vetores adenovirais. As células HEK293T, sob condições específicas de cultura, são transfectadas com vetores que carregam elementos adenovirais e retrovirais, incluindo a origem de replicação do SV40, levando à produção de partículas semelhantes a vírus (VLPs).

As VLPs, desprovidas de material genético viral, são fundamentais para formar a base de vacinas de subunidades e baseadas em VLPs. A produção de proteínas recombinantes nas células 293T é facilitada por vários métodos de transfecção, com ênfase na geração de proteínas de fusão AP e outros tipos de proteínas que formam o componente antigênico das vacinas.

Os recursos de engenharia genômica da linhagem celular 293T permitem a personalização de construções de expressão, impulsionando ainda mais a produção de vetores virais. Isso, aliado à capacidade de produzir proteínas em cultura em suspensão ou em condições de aderência, torna a linhagem celular 293T uma solução completa para o desenvolvimento de vacinas modernas.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.