Перейти до вмісту
Клітини HEK293T
Тканина
Нирка
Синоніми
Hek293T, HEK-293T, HEK 293T, HEK-293-T, HEK 293 T, 293-T, 293 T, 293T, Human Embryonic Kidney 293T, 293tsA1609neo

Документи

Клітини HEK293T

Cell line · Номер товару 300189

HEK 293T — похідна батьківської клітини HEK 293, що характеризується високою трансфекційною здатністю, — є універсальним і потужним інструментом у галузі біотехнології для...

€430.00без урахування податків та вартості доставки
Є в наявності
Лот
Рекомендовано (найсвіжіша партія)
  • CoA
1

01Загальна інформація

Опис

HEK 293T, високотрансфекційна похідна батьківської клітини HEK 293, виділяється як універсальний і потужний інструмент в галузі біотехнології для виробництва рекомбінантних білків і різних типів вакцин.

Клітини HEK-293T були отримані шляхом трансфекції ембріональних клітин нирки 293 плазмідою, що кодує великий Т-антиген SV40. Оригінальна клітинна лінія HEK293 була розроблена з епітеліальних клітин ембріональної тканини нирки людини, а її трансформація відбувалася в 293-му експерименті, проведеному дослідниками.

У сфері розробки вакцин клітини ембріональної нирки 293T є ключовими для виробництва вірусних векторів, включаючи аденовірусні вектори. Клітини HEK293T за певних умов культивування трансфікують векторами, що містять аденовірусні та ретровірусні елементи, в тому числі реплікацію SV40, що призводить до утворення вірусоподібних частинок (VLPs).

VLP, позбавлені вірусного генетичного матеріалу, є ключовими у формуванні основи субодиничних вакцин та вакцин на основі VLP. Виробництву рекомбінантних білків у клітинах лінії 293T сприяють різні методи трансфекції, з акцентом на генерування білків злиття AP та інших типів білків, які формують антигенний компонент вакцин.

Можливості геномної інженерії клітин лінії 293T дозволяють кастомізувати експресійні конструкції, що сприяє подальшому збільшенню виробництва вірусних векторів. У поєднанні зі здатністю продукувати білки в суспензійній культурі або в адгезивних умовах, це робить клітинну лінію 293T повноцінним рішенням для розробки сучасних вакцин.

Тканина
Нирка
Застосування
Розробка вакцин
Синоніми
  • Hek293T
  • HEK-293T
  • HEK 293T
  • HEK-293-T
  • HEK 293 T
  • 293-T
  • 293 T
  • 293T
  • Human Embryonic Kidney 293T
  • 293tsA1609neo

02Класифікація

Організм
Людина
Секс
Жінка
Характеристики росту
Прихильник
Статус ГМО
GMO-S1
Детальна інформація щодо статусу ГМО
GMO-S1: This HEK293T cell line contains SV40, supporting high-level expression of transfected plasmids and efficient viral packaging. The construct is integrated into human embryonic kidney cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere
Рівень біобезпеки
1

03Характеристики

Морфологія
Епітеліальноподібні
Пухлиноутворювальний
У голих мишей
Час подвоєння
30 годин

04Ідентифікатори

Посилання
HEK293T (номер за каталогом Cytion 300189)
Ідентифікаційний номер платника податків NCBI
9606
Целозавр
CVCL_0063

05Експресія та сприйнятливість

Рецептори, що експресуються
Вітронектин
Експресія білків
CEA негативний, p53 позитивний

06Обробка та вирощування

Живильне середовище
EMEM (MEM Eagle), w: 2 мМ L-глутамін, w: 2,2 г/л NaHCO3, w: EBSS (цит. номер 820100a)
Атмосфера інкубації

37°C, 5% CO2, волога атмосфера.

Добавки
Додайте до середовища 10% FBS та 1% NEAA
Реагент для дисоціації
Аккутаза
Пересадка в нове середовище
Видаліть старе середовище з прилиплих клітин і промийте їх PBS, в якому бракує кальцію і магнію. Для колб T25 використовуйте 3-5 мл PBS, а для колб T75 - 5-10 мл. Потім повністю покрийте клітини аккутазою, використовуючи 1-2 мл для колб Т25 і 2,5 мл для колб Т75. Залиште клітини інкубуватися при кімнатній температурі протягом 8-10 хвилин, щоб відокремити їх. Після інкубації обережно змішайте клітини з 10 мл середовища, щоб ресуспендувати їх, а потім центрифугуйте при 300xg протягом 3 хвилин. Викиньте надосадову рідину, ресуспендуйте клітини у свіжому середовищі та перенесіть їх у нові колби, які вже містять свіже середовище.
Щільність висіву
1 x 104 клітин/см2 дасть злитий шар приблизно за 4 дні
Оновлення рідини
2 рази на тиждень
Відновлення після відлиги
Після розморожування висійте клітини з щільністю 5 x 104 клітин/см2 і дайте клітинам відновитися після процесу заморожування та прикріпитися протягом щонайменше 24 годин.
Розморожування та культивування
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Контроль якості та кріоконсервація

Стерильність

Зараження мікоплазмою виключається за допомогою аналізів на основі ПЛР та люмінесцентних методів виявлення мікоплазми.

Щоб переконатися у відсутності бактеріального, грибкового або дріжджового забруднення, клітинні культури піддаються щоденному візуальному контролю.

Середовище для заморожування
Як середовище кріоконсервування ми використовуємо повне живильне середовище (включаючи FBS) + 10% ДМСО для адекватної життєздатності після відтавання або CM-1 (номер за каталогом Cytion 800100), до складу якого входять оптимізовані осмопротектори та метаболічні стабілізатори для прискорення відновлення та зменшення кріоіндукованого стресу.
Умови зберігання

Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот.

Умови доставки

Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і без зволікань перемістіть флакони у відповідне місце зберігання.

08Донор

Вік донора
Плід