Cellule HEK293T

La HEK 293T, un derivato altamente trasfettabile della cellula parentale HEK 293, si distingue come strumento versatile e potente nel campo delle biotecnologie per la produzione di proteine ricombinanti e di vari tipi di vaccini.

Le cellule HEK-293T sono state generate trasfettando cellule embrionali di rene 293 con un plasmide che codifica l'antigene SV40 large T. La linea cellulare HEK293 originale è stata sviluppata a partire dalle cellule epiteliali del tessuto renale embrionale umano e la sua trasformazione è avvenuta in quello che è stato in particolare il 293° esperimento condotto dai ricercatori.

Nel campo dello sviluppo dei vaccini, le cellule 293T del rene embrionale sono fondamentali per la produzione di vettori virali, compresi i vettori di adenovirus. Le cellule HEK293T, in condizioni di coltura specifiche, vengono trasfettate con vettori che trasportano elementi adenovirali e retrovirali, tra cui l'origine di replicazione SV40, portando alla produzione di particelle simil-virali (VLP).

Le VLP, prive di materiale genetico virale, sono fondamentali per costituire la base dei vaccini a subunità e a VLP. La produzione di proteine ricombinanti nelle cellule 293T è facilitata da vari metodi di trasfezione, con particolare attenzione alla generazione di proteine di fusione AP e di altri tipi di proteine che costituiscono la componente antigenica dei vaccini.

Le capacità di ingegneria genomica della linea cellulare 293T consentono di personalizzare i costrutti di espressione, favorendo ulteriormente la produzione di vettori virali. Questo, unito alla capacità di produrre proteine in coltura in sospensione o in condizioni aderenti, rende la linea cellulare 293T una soluzione completa per lo sviluppo di vaccini moderni.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia