Células HEK293

A linhagem celular HEK293, uma linhagem epitelial imortalizada derivada de células renais embrionárias humanas na década de 1970 por Alex van der Eb, na Universidade de Utrecht, tornou-se um modelo experimental fundamental na biologia molecular e em aplicações biotecnológicas devido à sua notável versatilidade e facilidade de manipulação genética.

A transformação da linhagem celular HEK293 envolveu a integração de um segmento específico do DNA do adenovírus 5, incorporando os genes adenovirais E1A e E1B ao genoma celular. A modificação do DNA adenoviral conferiu à linhagem celular a capacidade de absorver DNA estranho de forma eficiente, uma característica conhecida como alta eficiência de transfecção. A integração do DNA viral no genoma das células HEK293 resultou na imortalização celular e aumentou significativamente a utilidade dessas células em aplicações biotecnológicas, facilitando a incorporação e a expressão estáveis de DNA exógeno, um processo denominado transfecção estável. Essa capacidade permite a presença e a função persistentes de genes estranhos dentro das células, tornando as células HEK293 uma ferramenta inestimável para estudos genéticos e biotecnologia.

Como resultado, as células HEK293 tornaram-se um recurso fundamental na biotecnologia para a produção de proteínas recombinantes, incluindo proteínas terapêuticas vitais, e atuam como células-hospedeiras robustas para a geração de vetores virais, particularmente vetores adenovirais e lentivirais. As células HEK 293 são essenciais na indústria farmacêutica para ensaios de triagem de alto rendimento, a fabricação de terapias gênicas direcionadas a genes específicos relacionados a doenças monogênicas e estudos de infecção adenoviral. 

Na biotecnologia industrial, a utilidade da linhagem celular humana HEK293 se estende à produção de enzimas recombinantes, à produção de vetores virais, como os vetores adenovirais, à produção de proteínas e ao desenvolvimento de biossensores. A pesquisa toxicológica se beneficia da aplicação da linhagem celular HEK na avaliação dos impactos de substâncias químicas na biologia celular, incluindo os efeitos em células renais típicas e o potencial para terapias gênicas. A capacidade da linhagem celular imortal HEK293 de produzir proteínas nativas de forma eficiente destaca seu papel essencial na pesquisa médica, incluindo a pesquisa sobre o câncer e a exploração dos fundamentos da terapia gênica.

As células HEK293 oferecem uma plataforma única para o estudo da biologia celular e de proteínas de interesse, superando outras linhas celulares em versatilidade e utilidade, tanto em aplicações de pesquisa quanto em aplicações industriais. Em comparação, as células HEK293T, uma variante da HEK293, são modificadas para aumentar a eficiência de transfecção; as células HEK293F são adaptadas para cultura em suspensão a fim de facilitar a produção de proteínas em larga escala; e outras linhagens celulares de mamíferos, como as células Vero, derivadas de tecido renal de macaco, são utilizadas principalmente no desenvolvimento de vacinas e em estudos virais.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.