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HROC18
Tessuto
Colon (coecum), UICC I
Malattia
Adenocarcinoma primario, stadio TNM T2N0M0 R0L0V0, grading G2, Lk(n) + 0, ∑ Lk(n) 28
Sito metastatico
Non applicabile (stadio I secondo l’UICC; TNM T2N0M0; assenza di metastasi regionali o a distanza)
Sinonimi
HROC 18

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HROC18

Cell line · Codice prodotto 300808

This is one cell line of a series of tumor cell lines which have been established by PD Dr. Michael Linnebacher since 2006. HROC18 was derived from a primary...

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01Informazioni generali

Descrizione
Si tratta di una linea cellulare di una serie di linee cellulari tumorali create dal PD Dr. Michael Linnebacher a partire dal 2006. HROC18 deriva da un adenocarcinoma primario a cellule chiare. Le cellule sono globose con bordi indistinti, hanno un elevato rapporto tra nucleo e citoplasma e presentano microvilli e desmosomi. Possono essere coltivate in agar morbido.
Tessuto
Colon (coecum), UICC I
Malattia
Adenocarcinoma primario, stadio TNM T2N0M0 R0L0V0, grading G2, Lk(n) + 0, ∑ Lk(n) 28
Sito metastatico
Non applicabile (stadio I secondo l’UICC; TNM T2N0M0; assenza di metastasi regionali o a distanza)
Applicazioni
Ricerca sul cancro del colon-retto; biologia del cancro del colon-retto in fase iniziale; modellizzazione del cancro del colon-retto con mutazioni dei geni APC e p53; valutazione della sensibilità ai farmaci e delle terapie mirate; immunologia del cancro del colon-retto; studi basati su biobanche HROC abbinate ai pazienti
Sinonimi
  • HROC 18

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
Senza OGM
Dettagli sullo stato degli OGM
No genetic modification; wildtype patient-derived CRC cell line established by PD Dr. Linnebacher. Confirmed free of HBV, HCV, HIV.
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tipo di cellula
Cellule epiteliali
Tumorigenico
Sì, in topi nudi immunosoppressi
Stato di ploidia
Aneuploide
Stato MSI
MSS
Tempo di raddoppio
30 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
HROC18 (numero di catalogo Cytion 300808)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0B45

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
Beta-actina, osteopontina, PTEN
Espressione dell'antigene
CD15+, CD24+, CD44+, CD55+, CD58+, CD50+, CD 54+, CD66acde+, CD71+, CD102+, CD326+ , CD80- , CD86-, EpCAM+, HLA-A2+, EGFR+
Profilo mutazionale
APCmut, p53mut, K-Raswt, N-Raswt, H-Raswt, B-RAFwt, PIK3CA mut
Virus
Privo di virus patogeni umani HBV, HCV, HIV.

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L di glucosio, w: 2,5 mM di L-Glutammina, w: 15 mM di HEPES, w: 0,5 mM di Sodio piruvato, w: 1,2 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820400a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rapporto di frazionamento
da 1 a 3
Densità di semina
2 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
Ogni 3-5 giorni
Recupero post-scongelamento
da 1 a 2 settimane
Scongelamento e coltura

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
65 anni
Etnia
Caucasico