Pereiti prie turinio
HK-CRISPR-NUP205-mEGFP
Audinys
Endocervix
Liga
Adenokarcinoma
Metastazių vieta
Pirminės naviko lokalizacijos vieta (gimdos kaklelio vidinė dalis)
Sinonimai
HK-CRISPR-NUP205-mEGFP #81

Dokumentai

HK-CRISPR-NUP205-mEGFP

Cell line · Prekės numeris 301574

Ląstelių linija HK-CRISPR-NUP205-mEGFP yra genetiškai modifikuota žmogaus ląstelių linija, sukurta siekiant tirti nukleoporiną 205 (NUP205) ir jo vaidmenį branduolio porose...

€800.00neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

Pritaikymas / Rekomendacijos

Yra sandėlyje
Lot
Rekomenduojama (šviežiausia partija)
1

01Bendra informacija

Aprašymas

HK-CRISPR-NUP205-mEGFP ląstelių linija yra genetiškai modifikuota žmogaus ląstelių linija, skirta tirti nukleoporiną 205 (NUP205) ir jo vaidmenį branduolio porų komplekse. Modifikuota naudojant CRISPR-Cas9, kad NUP205 būtų pažymėtas monomeriniu sustiprintu žaliuoju fluorescenciniu baltymu (mEGFP), ji leidžia vizualizuoti ir stebėti NUP205 gyvose ląstelėse, taip padedant tirti branduolio transportavimo mechanizmus ir branduolio porų komplekso dinamiką.

NUP205 yra svarbus branduolio porų komplekso komponentas, reguliuojantis molekulių pernešimą tarp branduolio ir citoplazmos. NUP205 žymėjimas mEGFP leidžia tyrėjams stebėti jo lokalizaciją ir elgesį realiuoju laiku fluorescenciniame mikroskope, todėl ši ląstelių linija ypač naudinga tiriant branduolio porų kompleksų struktūrinius ir funkcinius aspektus bei jų vaidmenį genų raiškoje, RNR apdorojime ir ląstelių cikle.

HK-CRISPR-NUP205-mEGFP ląstelių linija yra galingas įrankis tiriant nukleocitoplazmos pernašos mechanizmus ir branduolio porų komplekso vaidmenį ląstelių homeostazėje. Ji taip pat vertinga tiriant, kaip branduolio porų funkcijos sutrikimai lemia tokias ligas kaip vėžys ir neurodegeneraciniai sutrikimai, ir yra patikimas modelis, padedantis geriau suprasti branduolio pernašą ir jos reikšmę žmonių sveikatai.

Audinys
Endocervix
Liga
Adenokarcinoma
Metastazių vieta
Pirminės naviko lokalizacijos vieta (gimdos kaklelio vidinė dalis)
Paraiškos
Branduolinio porų komplekso (NPC) karkaso biologija; NUP205 karkaso nukleoporino vaizdinimas; mEGFP gyvų ląstelių vizualizavimas; superrezoliucijos mikroskopija; CRISPR „knock-in“ metodo patvirtinimas; branduolinis-citoplazminis transportas; NPC struktūrinė organizacija
Sinonimai
  • HK-CRISPR-NUP205-mEGFP #81

02Klasifikacija

Organizmas
Žmogus
Seksas
Moteris
Augimo savybės
Prisijungęs
GMO statusas
GMO-S1
Išsami informacija apie GMO statusą
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-engineered mEGFP fusion at the NUP205 locus for scaffold-level nuclear pore research. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologinio saugumo lygis
1

03Charakteristikos

Morfologija
Į epitelį panašios ląstelės su mozaikos formos akmenukais
Ląstelių tipas
Epitelio ląstelės

04Identifikatoriai

Nuoroda
HK-CRISPR-NUP205-mEGFP (Cytion katalogo numeris 301574)
NCBI mokesčių identifikavimo kodas
9606
Cellosaurus
CVCL_UR49
Indėlininkas
Ellenbergo laboratorija (EMBL)

05Išraiška ir jautrumas

Produktai
EGFP (sustiprintas žaliasis fluorescuojantis baltymas)

06Laikymas ir auginimas

Maitinamoji terpė
DMEM, š: 4,5 g/l gliukozės, š: 4 mM L-glutamino, š: 3,7 g/l NaHCO3, š: 1,0 mM natrio piruvato (Cytion gaminio numeris 820300a)
Inkubacijos aplinka

37 °C, 5 %CO2, drėkintoje atmosferoje.

Maisto papildai
Papildykite terpę 10 % FBS
Disociacijos reagentas
Accutase
Subkultūrinis auginimas
Pašalinkite seną terpę nuo prilipusių ląstelių ir nuplaukite jas PBS, kuriame nėra kalcio ir magnio. T25 kolboms naudokite 3-5 ml PBS, o T75 kolboms - 5-10 ml. Tuomet visiškai užpilkite ląsteles "Accutase", naudodami 1-2 ml T25 kolboms ir 2,5 ml T75 kolboms. Leiskite ląstelėms inkubuotis kambario temperatūroje 8-10 minučių, kad jos atsiskirtų. Po inkubacijos atsargiai sumaišykite ląsteles su 10 ml terpės, kad jos vėl suspenduotų, tada 3 minutes centrifuguokite 300xg greičiu. Išmeskite supernatantą, vėl sutirpinkite ląsteles šviežioje terpėje ir perkelkite jas į naujas kolbas, kuriose jau yra šviežia terpė.
Skysčių atnaujinimas
2-3 kartus per savaitę
Atšildymas ir auginimas
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kokybės kontrolė ir kriokonservavimas

Sterilumas

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Šaldymo terpė
Kaip kriokonservavimo terpę naudojame visišką augimo terpę (įskaitant FBS) + 10 % DMSO, kad būtų užtikrintas tinkamas gyvybingumas po atšildymo, arba CM-1 (Cytion katalogo numeris 800100), kurioje yra optimizuotų osmoprotektorių ir medžiagų apykaitos stabilizatorių, kad būtų pagerintas atsigavimas ir sumažintas kriokonservavimo sukeltas stresas.
Laikymo sąlygos

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Pristatymo sąlygos

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

08Donoras

Donoro amžius
30 metų
Etninė priklausomybė
Afroamerikietis