Gå til innholdet
HK-CRISPR-NUP205-mEGFP
Vev
Endocervix
Sykdom
Adenokarsinom
Metastaseområde
Primær tumorlokalisering (endocervix)
Synonymer
HK-CRISPR-NUP205-mEGFP #81

Dokumenter

HK-CRISPR-NUP205-mEGFP

Cell line · Produktnummer 301574

HK-CRISPR-NUP205-mEGFP-cellelinjen er en genetisk modifisert menneskelig cellelinje utviklet for å studere nukleoporin 205 (NUP205) og dets rolle i kjernens po...

€800.00ekskl. mva. og frakt
På lager
Lot
Anbefalt (det ferskeste partiet)
1

01Generell informasjon

Beskrivelse

HK-CRISPR-NUP205-mEGFP-cellelinjen er en genmodifisert human cellelinje som er utviklet for å studere nukleoporin 205 (NUP205) og dets rolle i kjerneporkomplekset. Den er modifisert med CRISPR-Cas9 for å merke NUP205 med monomert forsterket grønt fluorescerende protein (mEGFP), noe som muliggjør visualisering og sporing av NUP205 i levende celler og bidrar til forskning på nukleære transportmekanismer og dynamikken i kjerneporkomplekset.

NUP205 er en viktig komponent i kjerneporkomplekset, som regulerer molekyltransporten mellom kjernen og cytoplasmaet. Ved å merke NUP205 med mEGFP kan forskere observere lokalisering og oppførsel i sanntid under et fluorescensmikroskop, noe som gjør denne cellelinjen spesielt nyttig for å studere kjerneporkompleksenes strukturelle og funksjonelle aspekter og deres rolle i genuttrykk, RNA-prosessering og cellesyklus.

HK-CRISPR-NUP205-mEGFP-cellelinjen er et kraftig verktøy for å undersøke nukleocytoplasmatiske transportmekanismer og kjerneporekompleksets rolle i cellens homeostase. Den er også verdifull for å utforske hvordan forstyrrelser i kjerneporefunksjonen bidrar til sykdommer som kreft og nevrodegenerative lidelser, og den er en robust modell for å øke vår forståelse av kjernetransport og dens betydning for menneskers helse.

Vev
Endocervix
Sykdom
Adenokarsinom
Metastaseområde
Primær tumorlokalisering (endocervix)
Søknader
Biologi knyttet til nukleoporekomplekset (NPC); avbildning av nukleoporinet NUP205 i NPC-strukturen; visualisering av mEGFP i levende celler; superoppløsningsmikroskopi; validering av CRISPR-knock-in; transport mellom kjernen og cytoplasmaet; strukturell organisering av NPC
Synonymer
  • HK-CRISPR-NUP205-mEGFP #81

02Klassifisering

Organisme
Menneske
Sex
Kvinne
Vekstegenskaper
Tilhenger
GMO-status
GMO-S1
Detaljer om GMO-status
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-engineered mEGFP fusion at the NUP205 locus for scaffold-level nuclear pore research. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosikkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Morfologi
Epitel-lignende celler med mosaikksteinform
Celletype
Epitelceller

04Identifikatorer

Kildehenvisning
HK-CRISPR-NUP205-mEGFP (Cytion katalognummer 301574)
NCBI-skattenummer
9606
Cellosaurus
CVCL_UR49
Innskjærer
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

05Uttrykk og mottakelighet

Produkter
EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein)

06Håndtering og kultur

Næringsmedium
DMEM, m: 4,5 g/L glukose, m: 4 mM L-glutamin, m: 3,7 g/L NaHCO3, m: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikkelnummer 820300a)
Inkubasjonsatmosfære

37 °C, 5 %CO2, befuktet atmosfære.

Kosttilskudd
Suppler mediet med 10 % FBS
Dissosiasjonsmiddel
Accutase
Subkultivering
Fjern det gamle mediet fra de adherente cellene, og vask dem med PBS uten kalsium og magnesium. Bruk 3-5 ml PBS for T25-kolber og 5-10 ml for T75-kolber. Dekk deretter cellene helt med Accutase, med 1-2 ml for T25-kolber og 2,5 ml for T75-kolber. La cellene inkubere i romtemperatur i 8-10 minutter for å løsne dem. Etter inkubasjon blandes cellene forsiktig med 10 ml medium for å resuspendere dem, og sentrifuger deretter ved 300xg i 3 minutter. Kast supernatanten, resuspender cellene i nytt medium, og overfør dem til nye kolber som allerede inneholder nytt medium.
Væskefornyelse
2 til 3 ganger per uke
Tining og dyrking
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll og kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

Frysemedium
Som kryopreserveringsmedium bruker vi komplett vekstmedium (inkludert FBS) + 10 % DMSO for tilstrekkelig levedyktighet etter opptining, eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som inneholder optimaliserte osmobeskyttende midler og metabolske stabilisatorer for å øke utvinningen og redusere kryoindusert stress.
Oppbevaringsbetingelser

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Fraktvilkår

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

08Donor

Donorens alder
30 år
Etnisitet
Afroamerikaner