Μετάβαση στο περιεχόμενο
HK-CRISPR-NUP205-mEGFP
Ιστός
Ενδοτράχηλος
Ασθένεια
Αδενοκαρκίνωμα
Θέση μετάστασης
Θέση πρωτογενούς όγκου (ενδοτράχηλος)
Συνώνυμα
HK-CRISPR-NUP205-mEGFP #81

Έγγραφα

HK-CRISPR-NUP205-mEGFP

Cell line · Αριθμός προϊόντος 301574

Η κυτταρική σειρά HK-CRISPR-NUP205-mEGFP είναι μια γενετικά τροποποιημένη ανθρώπινη κυτταρική σειρά που έχει σχεδιαστεί για τη μελέτη της νουκλεοπορίνης 205 (NUP205) και του ρόλου της στον πυρηνικό...

€800.00χωρίς ΦΠΑ και έξοδα αποστολής

Προσαρμογή / Προτάσεις

Σε απόθεμα
Lot
Συνιστάται (η πιο φρέσκια παρτίδα)
1

01Γενικές πληροφορίες

Περιγραφή

Η κυτταρική σειρά HK-CRISPR-NUP205-mEGFP είναι μια γενετικά τροποποιημένη ανθρώπινη κυτταρική σειρά που έχει σχεδιαστεί για τη μελέτη της νουκλεοπορίνης 205 (NUP205) και του ρόλου της στο σύμπλεγμα του πυρηνικού πόρου. Τροποποιημένη με CRISPR-Cas9 για την επισήμανση της NUP205 με μονομερή ενισχυμένη πράσινη φθορίζουσα πρωτεΐνη (mEGFP), επιτρέπει την οπτικοποίηση και την παρακολούθηση της NUP205 σε ζωντανά κύτταρα, βοηθώντας την έρευνα σχετικά με τους μηχανισμούς πυρηνικής μεταφοράς και τη δυναμική του συμπλόκου του πυρηνικού πόρου.

Το NUP205 είναι ένα κρίσιμο συστατικό του συμπλέγματος πυρηνικών πόρων, που ρυθμίζει τη μεταφορά μορίων μεταξύ του πυρήνα και του κυτταροπλάσματος. Η επισήμανση του NUP205 με mEGFP επιτρέπει στους ερευνητές να παρατηρούν τον εντοπισμό και τη συμπεριφορά του σε πραγματικό χρόνο σε μικροσκόπιο φθορισμού, καθιστώντας αυτή την κυτταρική σειρά ιδιαίτερα χρήσιμη για τη μελέτη των δομικών και λειτουργικών πτυχών των συμπλόκων πυρηνικών πόρων και των ρόλων τους στην έκφραση γονιδίων, την επεξεργασία RNA και τον κυτταρικό κύκλο.

Η κυτταρική σειρά HK-CRISPR-NUP205-mEGFP είναι ένα ισχυρό εργαλείο για τη διερεύνηση των μηχανισμών νουκλεοκυτταροπλασματικής μεταφοράς και του ρόλου του συμπλόκου των πυρηνικών πόρων στην κυτταρική ομοιόσταση. Είναι επίσης πολύτιμη για τη διερεύνηση του τρόπου με τον οποίο οι διαταραχές στη λειτουργία του πυρηνικού πόρου συμβάλλουν σε ασθένειες όπως ο καρκίνος και οι νευροεκφυλιστικές διαταραχές, προσφέροντας ένα ισχυρό μοντέλο για την προώθηση της κατανόησης της πυρηνικής μεταφοράς και των επιπτώσεών της στην ανθρώπινη υγεία.

Ιστός
Ενδοτράχηλος
Ασθένεια
Αδενοκαρκίνωμα
Θέση μετάστασης
Θέση πρωτογενούς όγκου (ενδοτράχηλος)
Εφαρμογές
Βιολογία του σκελετού του συμπλέγματος των πυρηνικών πόρων (NPC)· απεικόνιση της νουκλεοπορίνης του σκελετού NUP205· απεικόνιση ζωντανών κυττάρων με mEGFP· μικροσκοπία υπερ-ανάλυσης· επικύρωση της μεθόδου knock-in με CRISPR· πυρηνοκυτταροπλασματική μεταφορά· δομική οργάνωση του NPC
Συνώνυμα
  • HK-CRISPR-NUP205-mEGFP #81

02Ταξινόμηση

Οργανισμός
Άνθρωπος
Σεξ
Γυναίκα
Ιδιότητες ανάπτυξης
Πιστός
Κατάσταση όσον αφορά τους ΓΤΟ
GMO-S1
Λεπτομέρειες σχετικά με την κατάσταση των ΓΤΟ
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-engineered mEGFP fusion at the NUP205 locus for scaffold-level nuclear pore research. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Επίπεδο βιοασφάλειας
1

03Χαρακτηριστικά

Μορφολογία
Επιθηλιακά κύτταρα με ψηφιδωτό σχήμα πέτρας
Τύπος κυττάρου
Επιθηλιακά κύτταρα

04Αναγνωριστικά

Παραπομπή
HK-CRISPR-NUP205-mEGFP (αριθμός καταλόγου Cytion 301574)
Αριθμός φορολογικού μητρώου NCBI
9606
Κελλοσαύρος
CVCL_UR49
Καταθέτης
Εργαστήριο Ellenberg (EMBL)

05Έκφραση και ευαισθησία

Προϊόντα
EGFP (ενισχυμένη πράσινη φθορίζουσα πρωτεΐνη)

06Χειρισμός και καλλιέργεια

Θρεπτικό μέσο
DMEM, w: 4,5 g/L γλυκόζη, w: 4 mM L-γλουταμίνη, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM πυρουβικό νάτριο (αριθμός άρθρου Cytion 820300a)
Ατμόσφαιρα επώασης

37°C, 5%CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

Συμπληρώματα
Συμπληρώστε το μέσο με 10% FBS
Αντιδραστήριο αποσύνδεσης
Accutase
Αναπαραγωγή σε υποκαλλιέργεια
Αφαιρέστε το παλιό μέσο από τα προσκολλημένα κύτταρα και πλύντε τα με PBS που δεν περιέχει ασβέστιο και μαγνήσιο. Για φιάλες T25, χρησιμοποιήστε 3-5 ml PBS και για φιάλες T75, χρησιμοποιήστε 5-10 ml. Στη συνέχεια, καλύψτε πλήρως τα κύτταρα με Accutase, χρησιμοποιώντας 1-2 ml για φιάλες T25 και 2,5 ml για φιάλες T75. Αφήστε τα κύτταρα να επωαστούν σε θερμοκρασία δωματίου για 8-10 λεπτά για να αποκολληθούν. Μετά την επώαση, αναμείξτε απαλά τα κύτταρα με 10 ml μέσου για να ανασυσταθούν και, στη συνέχεια, φυγοκεντρίστε στα 300xg για 3 λεπτά. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό, ανασυστάστε τα κύτταρα σε φρέσκο μέσο και μεταφέρετέ τα σε νέες φιάλες που περιέχουν ήδη φρέσκο μέσο.
Ανανέωση υγρών
2 έως 3 φορές την εβδομάδα
Απόψυξη και καλλιέργεια
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Έλεγχος ποιότητας και κρυοσυντήρηση

Στειρότητα

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Μέσο κατάψυξης
Ως μέσο κρυοσυντήρησης, χρησιμοποιούμε πλήρες μέσο ανάπτυξης (συμπεριλαμβανομένου του FBS) + 10% DMSO για επαρκή βιωσιμότητα μετά την απόψυξη, ή CM-1 (αριθμός καταλόγου Cytion 800100), το οποίο περιλαμβάνει βελτιστοποιημένα ωσμοπροστατευτικά και μεταβολικούς σταθεροποιητές για την ενίσχυση της ανάκαμψης και τη μείωση του στρες που προκαλείται από την κρυοσυντήρηση.
Συνθήκες αποθήκευσης

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Όροι αποστολής

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

08Δωρητής

Ηλικία δωρητή
30 χρόνια
Εθνικότητα
Αφροαμερικανός