Ga naar de inhoud
HK-CRISPR-NUP205-mEGFP
Weefsel
Endocervix
Ziekte
Adenocarcinoom
Plaats van uitzaaiingen
Locatie van de primaire tumor (endocervix)
Synoniemen
HK-CRISPR-NUP205-mEGFP #81

Documenten

HK-CRISPR-NUP205-mEGFP

Cell line · Productnummer 301574

De HK-CRISPR-NUP205-mEGFP-cellijn is een genetisch gemodificeerde menselijke cellijn die is ontwikkeld om nucleoporine 205 (NUP205) en de rol daarvan in het kern... te bestuderen.

€800.00excl. btw en verzendkosten

Maatwerk / Aanbevelingen

Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
1

01Algemene informatie

Beschrijving

De HK-CRISPR-NUP205-mEGFP cellijn is een genetisch gemanipuleerde menselijke cellijn die is ontworpen om nucleoporine 205 (NUP205) en zijn rol in het nucleaire poriecomplex te bestuderen. Gemodificeerd met CRISPR-Cas9 om NUP205 te taggen met monomeer versterkt groen fluorescerend eiwit (mEGFP), maakt het visualisatie en tracering van NUP205 in levende cellen mogelijk, wat onderzoek naar nucleaire transportmechanismen en de dynamica van het nucleaire poriecomplex ondersteunt.

NUP205 is een essentieel onderdeel van het nucleaire porecomplex, dat het transport van moleculen tussen de kern en het cytoplasma reguleert. Door NUP205 te taggen met mEGFP kunnen onderzoekers de lokalisatie en het gedrag ervan in real-time observeren onder een fluorescentiemicroscoop, waardoor deze cellijn bijzonder nuttig is voor het bestuderen van de structurele en functionele aspecten van nucleaire poriecomplexen en hun rol in genexpressie, RNA-verwerking en de celcyclus.

De HK-CRISPR-NUP205-mEGFP cellijn is een krachtig hulpmiddel voor het onderzoeken van nucleocytoplasmatische transportmechanismen en de rol van het nucleaire poriecomplex in cellulaire homeostase. Het is ook waardevol voor het onderzoeken hoe verstoringen in de werking van de nucleaire porie bijdragen aan ziekten zoals kanker en neurodegeneratieve aandoeningen, en biedt een robuust model voor het bevorderen van ons begrip van nucleair transport en de implicaties daarvan voor de menselijke gezondheid.

Weefsel
Endocervix
Ziekte
Adenocarcinoom
Plaats van uitzaaiingen
Locatie van de primaire tumor (endocervix)
Toepassingen
Biologie van het skelet van het nucleaire poriëncomplex (NPC); beeldvorming van het NUP205-skelet van nucleoporines; visualisatie van levende cellen met mEGFP; superresolutiemicroscopie; validatie van CRISPR-knock-in; nucleocytoplasmatisch transport; structurele organisatie van het NPC
Synoniemen
  • HK-CRISPR-NUP205-mEGFP #81

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Vrouw
Groei-eigenschappen
Aanhanger
GGO-status
GMO-S1
Details over de GGO-status
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-engineered mEGFP fusion at the NUP205 locus for scaffold-level nuclear pore research. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Epitheelachtige cellen met mozaïeksteenvorm
Celtype
Epitheelcellen

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
HK-CRISPR-NUP205-mEGFP (Cytion catalogusnummer 301574)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_UR49
Inlegger
Het Ellenberg Lab (EMBL)

05Expressie en vatbaarheid

Producten
EGFP (verbeterd groen fluorescerend eiwit)

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat (Cytion artikelnummer 820300a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Vloeistofverversing
2 tot 3 keer per week
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
30 jaar
Etnische afkomst
Afro-Amerikaan