- Tessuto
- Endocervice
- Malattia
- Adenocarcinoma
- Sito metastatico
- Sede del tumore primario (endocervice)
- Sinonimi
- HK-CRISPR-NUP205-mEGFP #81
Documenti
HK-CRISPR-NUP205-mEGFP
Cell line · Codice prodotto 301574
La linea cellulare HK-CRISPR-NUP205-mEGFP è una linea cellulare umana geneticamente modificata, progettata per studiare la nucleoporina 205 (NUP205) e il suo ruolo nel poro nucleare...
Personalizzazione / Suggerimenti
- HK-CRISPR-NUP205-mEGFPCell line€800.00
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01Informazioni generali
- Descrizione
La linea cellulare HK-CRISPR-NUP205-mEGFP è una linea cellulare umana geneticamente modificata per studiare la nucleoporina 205 (NUP205) e il suo ruolo nel complesso del poro nucleare. Modificata con CRISPR-Cas9 per marcare NUP205 con la proteina verde fluorescente monomerica potenziata (mEGFP), consente la visualizzazione e il tracciamento di NUP205 in cellule vive, favorendo la ricerca sui meccanismi di trasporto nucleare e sulla dinamica del complesso dei pori nucleari.
NUP205 è un componente critico del complesso del poro nucleare, che regola il trasporto di molecole tra il nucleo e il citoplasma. La marcatura di NUP205 con mEGFP consente ai ricercatori di osservarne la localizzazione e il comportamento in tempo reale al microscopio a fluorescenza, rendendo questa linea cellulare particolarmente utile per studiare gli aspetti strutturali e funzionali dei complessi poro nucleare e il loro ruolo nell'espressione genica, nell'elaborazione dell'RNA e nel ciclo cellulare.
La linea cellulare HK-CRISPR-NUP205-mEGFP è un potente strumento per studiare i meccanismi di trasporto nucleocitoplasmatico e il ruolo del complesso del poro nucleare nell'omeostasi cellulare. È anche utile per esplorare come le interruzioni della funzione del poro nucleare contribuiscano a malattie come il cancro e i disturbi neurodegenerativi, offrendo un modello robusto per far progredire la nostra comprensione del trasporto nucleare e le sue implicazioni per la salute umana.
- Tessuto
- Endocervice
- Malattia
- Adenocarcinoma
- Sito metastatico
- Sede del tumore primario (endocervice)
- Applicazioni
- Biologia dello scaffold del complesso dei pori nucleari (NPC); imaging delle nucleoporine dello scaffold NUP205; visualizzazione di cellule vive con mEGFP; microscopia a super-risoluzione; validazione del knock-in CRISPR; trasporto nucleocitoplasmatico; organizzazione strutturale dell'NPC
- Sinonimi
- HK-CRISPR-NUP205-mEGFP #81
02Classificazione
- Organismo
- Umano
- Sesso
- Donna
- Proprietà di crescita
- Aderente
- Presenza di OGM
- GMO-S1
- Dettagli sullo stato degli OGM
- GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-engineered mEGFP fusion at the NUP205 locus for scaffold-level nuclear pore research. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Livello di biosicurezza
- 1
03Caratteristiche
- Morfologia
- Cellule simili a quelle epiteliali con forma di pietra a mosaico
- Tipo di cellula
- Cellule epiteliali
04Identificatori
- Riferimento bibliografico
- HK-CRISPR-NUP205-mEGFP (numero di catalogo Cytion 301574)
- Codice fiscale NCBI
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_UR49
- Depositario
- Il laboratorio Ellenberg (EMBL)
05Espressione e suscettibilità
- Prodotti
- EGFP (proteina verde fluorescente potenziata)
06Manipolazione e coltura
- Terreno di coltura
- DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
- Atmosfera di incubazione
37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.
- Integratori
- Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
- Reagente di dissociazione
- Accutase
- Subcoltura
- Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
- Rinnovo dei fluidi
- da 2 a 3 volte alla settimana
- Scongelamento e coltura
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Controllo di qualità e crioconservazione
- Sterilità
La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.
Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.
- Terreno di coltura congelato
- Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
- Condizioni di conservazione
Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.
- Condizioni di spedizione
Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.
08Donatore
- Età dei donatori
- 30 anni
- Etnia
- Afroamericano
09Aspetti legali e di sicurezza
- Misure di sicurezza
- Quando si prevede di conservare una crioviale in azoto liquido per un futuro scongelamento, è obbligatorio attenersi a rigorose misure di sicurezza. Guanti e indumenti protettivi appropriati sono essenziali e l'uso di una maschera facciale o di occhiali di sicurezza è richiesto durante il trasferimento dei campioni congelati da o verso il serbatoio di azoto liquido. Questo per ridurre il rischio di lesioni dovute a potenziali esplosioni di crioviali al momento della rimozione, che possono provocare la proiezione di frammenti taglienti.
- Garanzia
Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto
Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia
- Si applicano gli accordi con terze parti
- Sì