Gå direkte til indholdet
HK-CRISPR-NUP205-mEGFP
Væv
Endocervix
Sygdom
Adenokarcinom
Metastasested
Primærtumorens placering (endocervix)
Synonymer
HK-CRISPR-NUP205-mEGFP #81

Dokumenter

HK-CRISPR-NUP205-mEGFP

Cell line · Varenummer 301574

HK-CRISPR-NUP205-mEGFP-cellelinjen er en genetisk modificeret human cellelinje, der er udviklet til at undersøge nukleoporin 205 (NUP205) og dets rolle i kerneporerne...

€800.00ekskl. moms og fragt
På lager
Lot
Anbefalet (det nyeste parti)
1

01Generelle oplysninger

Beskrivelse

HK-CRISPR-NUP205-mEGFP-cellelinjen er en genetisk manipuleret human cellelinje, der er designet til at studere nucleoporin 205 (NUP205) og dets rolle i kerneporekomplekset. Den er modificeret med CRISPR-Cas9 til at mærke NUP205 med monomert forstærket grønt fluorescerende protein (mEGFP), hvilket muliggør visualisering og sporing af NUP205 i levende celler og hjælper med at forske i nukleare transportmekanismer og dynamikken i det nukleare porekompleks.

NUP205 er en kritisk komponent i kerneporekomplekset, der regulerer molekyltransporten mellem kernen og cytoplasmaet. Ved at mærke NUP205 med mEGFP kan forskere observere dens lokalisering og adfærd i realtid under et fluorescensmikroskop, hvilket gør denne cellelinje særligt nyttig til at studere kerneporekompleksers strukturelle og funktionelle aspekter og deres roller i genekspression, RNA-behandling og cellecyklus.

HK-CRISPR-NUP205-mEGFP-cellelinjen er et stærkt værktøj til at undersøge nukleocytoplasmatiske transportmekanismer og kerneporekompleksets rolle i den cellulære homeostase. Den er også værdifuld til at udforske, hvordan forstyrrelser i kerneporens funktion bidrager til sygdomme som kræft og neurodegenerative lidelser, hvilket giver en robust model til at fremme vores forståelse af nuklear transport og dens konsekvenser for menneskers sundhed.

Væv
Endocervix
Sygdom
Adenokarcinom
Metastasested
Primærtumorens placering (endocervix)
Anvendelser
Biologi vedrørende nukleoporekompleksets (NPC) skelet; billeddannelse af nukleoporinet NUP205 i skeletet; visualisering af mEGFP i levende celler; superopløsningsmikroskopi; validering af CRISPR-knock-in; transport mellem cellekerne og cytoplasma; NPC’s strukturelle opbygning
Synonymer
  • HK-CRISPR-NUP205-mEGFP #81

02Klassificering

Organisme
Menneske
Køn
Kvinde
Vækstegenskaber
Tilhænger
GMO-status
GMO-S1
Oplysninger om GMO-status
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-engineered mEGFP fusion at the NUP205 locus for scaffold-level nuclear pore research. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosikkerhedsniveau
1

03Egenskaber

Morfologi
Epithel-lignende celler med mosaikstenform
Celletype
Epitheliale celler

04Identifikatorer

Kildehenvisning
HK-CRISPR-NUP205-mEGFP (Cytion katalognummer 301574)
NCBI-skattenummer
9606
Cellosaurus
CVCL_UR49
Indskyder
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

05Udtryk og modtagelighed

Produkter
EGFP (forstærket grønt fluorescerende protein)

06Håndtering og opdræt

Næringsmedium
DMEM, w: 4,5 g/L glukose, w: 4 mM L-glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosfære

37°C, 5%CO2, befugtet atmosfære.

Kosttilskud
Suppler mediet med 10% FBS
Dissociationsreagens
Accutase
Oddyrkning
Fjern det gamle medium fra de klæbende celler, og vask dem med PBS, der ikke indeholder calcium og magnesium. Brug 3-5 ml PBS til T25-kolber og 5-10 ml til T75-kolber. Dæk derefter cellerne helt med Accutase, brug 1-2 ml til T25-kolber og 2,5 ml til T75-kolber. Lad cellerne inkubere ved stuetemperatur i 8-10 minutter for at løsne dem. Efter inkubationen blandes cellerne forsigtigt med 10 ml medium for at resuspendere dem, og centrifugeres derefter ved 300xg i 3 minutter. Kassér supernatanten, resuspender cellerne i frisk medium, og overfør dem til nye kolber, der allerede indeholder frisk medium.
Væskeudskiftning
2 til 3 gange om ugen
Optøning og dyrkning
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontrol og kryopræservering

Sterilitet

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

Frysemedium
Som kryopræserveringsmedium bruger vi komplet vækstmedium (inklusive FBS) + 10 % DMSO for tilstrækkelig levedygtighed efter optøning eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som indeholder optimerede osmobeskyttende stoffer og metaboliske stabilisatorer for at forbedre genopretningen og reducere kryo-induceret stress.
Opbevaringsbetingelser

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Leveringsbetingelser

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

08Donor

Donorens alder
30 år
Etnisk tilhørsforhold
Afroamerikaner