Przejdź do treści
HEK293-CLDN18.2
Chusteczka
Nerka płodu
Choroba
Zmodyfikowane/unieśmiertelnione; nie wywołujące nowotworów (na tle komórek HEK293)

Dokumenty

HEK293-CLDN18.2

Cell line · Numer produktu 305986

Zastrzeżenie: Podane ceny linii komórkowych dotyczą wyłącznie klientów akademickich i organizacji non-profit. W przypadku podmiotów komercyjnych ceny...

€1,900.00bez podatku i kosztów wysyłki
Wykonane na zamówienie
1

01Informacje ogólne

Opis

Zastrzeżenie: Podane ceny linii komórkowych dotyczą wyłącznie klientów akademickich lub organizacji non-profit. Dla podmiotów komercyjnych cena wynosi około 6 250 euro.
Jeśli reprezentujesz podmiot komercyjny lub nie masz pewności, która kategoria ma zastosowanie, prosimy o kontakt.


Komórki HEK293-CLDN18.2 to komórki ludzkiej embrionalnej nerki 293 (HEK293) zmodyfikowane genetycznie w celu stabilnej ekspresji ludzkiej izoformy 2 klaudyny 18 (CLDN18.2), białka transbłonowego związanego z połączeniami ścisłymi, należącego do rodziny klaudyn. CLDN18.2 jest izoformą specyficzną dla linii komórek żołądkowych, występującą normalnie wyłącznie w zróżnicowanych komórkach nabłonka błony śluzowej żołądka, gdzie jej domeny zewnątrzkomórkowe są w warunkach fizjologicznych w dużej mierze niedostępne. W przypadku transformacji nowotworowej zaburzenie polaryzacji nabłonkowej i struktury połączeń ścisłych powoduje ekspozycję CLDN18.2 na powierzchni komórek nowotworowych, co prowadzi do jego nadekspresji i dostępności w kilku nowotworach, w tym w gruczolakoraku żołądka, raku połączenia żołądkowo-przełykowego, raku trzustki i innych nowotworach złośliwych przewodu pokarmowego. Ze względu na bardzo ograniczoną dystrybucję w tkankach zdrowych i ekspozycję związaną z nowotworem, CLDN18.2 stał się klinicznie ważnym celem terapeutycznym w onkologii.

Komórki HEK293-CLDN18.2 są szeroko stosowane do opracowywania i charakteryzowania terapii ukierunkowanych na CLDN18.2, w tym przeciwciał monoklonalnych, koniugatów przeciwciało-lek, przeciwciał bispecyficznych, terapii komórkami CAR-T i CAR-NK oraz środków do obrazowania celowanego. Stabilny system ekspresji rekombinowanej umożliwia analizę ilościową powinowactwa wiązania antygenu, specyficzności epitopu, gęstości receptorów, kinetyki internalizacji oraz cytotoksyczności zależnej od celu. Komórki te są również powszechnie stosowane w testach cytometrii przepływowej, testach reporterowych, procesach przesiewania przeciwciał oraz badaniach funkcjonalności efektorów immunologicznych mających na celu ocenę cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) lub cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC). Ponieważ komórki HEK293 umożliwiają solidną ekspresję rekombinowanych białek błonowych i wydajną propagację, stanowią one niezawodną platformę do opracowywania standardowych testów CLDN18.2 i walidacji terapeutycznej.

Chusteczka
Nerka płodu
Choroba
Zmodyfikowane/unieśmiertelnione; nie wywołujące nowotworów (na tle komórek HEK293)
Zastosowania
Opracowywanie przeciwciał skierowanych przeciwko CLDN18.2 oraz kompleksów przeciwciało-leczivo (ADC); terapia komórkami CAR-T/CAR-NK; testy ADCC/CDC; cytometria przepływowa; środki terapeutyczne stosowane w leczeniu raka żołądka, przełomu żołądkowo-przełykowego i trzustki

02Klasyfikacja

Organizm
Człowiek
Seks
Kobieta
Właściwości związane ze wzrostem
Zwolennik
Status GMO
GMO-S1
Szczegółowe informacje dotyczące statusu GMO
GMO-S1: This HEK293 cell line contains a CLDN18.2 expression construct for tight junction antigen studies and targeted cancer therapy development. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Poziom bezpieczeństwa biologicznego
1

03Cechy charakterystyczne

Morfologia
Podobny do nabłonka
Typ komórki
Komórki nabłonkowe
Czas podwojenia
ok. 24–36 godzin

04Identyfikatory

Źródło
HEK293-CLDN18.2 (numer katalogowy Cytion 305986)
Numer identyfikacji podatkowej NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_E5J2

05Ekspresja i podatność

Antygeny powierzchniowe
CLDN18.2
Receptory ulegające ekspresji
CDLN18.2

06Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabilnej glutaminy, w: 2,0 g/L NaHCO3 (numer artykułu Cytion 820700a)
Atmosfera inkubacyjna

37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy
Do pożywki dodać 10% FBS, 1 mM pirogronianu sodu, 10 mM HEPES oraz 1% NEAA. Dodać blastycydynę (chlorowodorek blastycydyny) tak, aby uzyskać końcowe stężenie wynoszące 5 µg/mL.
Odczynnik dysocjacyjny
Trypsyna-EDTA
Hodowla komórek w subkulturze
W przypadku rutynowej hodowli komórek przylegających: Odessać starą pożywkę z przylegających komórek i przemyć je PBS w celu usunięcia pozostałości pożywki. Po odessaniu PBS, dodać odpowiednią objętość roztworu Trypsyna/EDTA w zależności od wielkości naczynia hodowlanego (np. 1 ml dla kolby T25, 3 ml dla kolby T75) i inkubować w temperaturze pokojowej lub 37°C do momentu odłączenia się komórek (5-10 minut). Monitoruj oderwanie pod mikroskopem i delikatnie postukaj w naczynie, jeśli to konieczne, aby uwolnić komórki. Po odłączeniu dodać pełną pożywkę w celu inaktywacji trypsyny/EDTA, delikatnie ponownie zawiesić komórki i przenieść porcję zawiesiny komórek do nowego naczynia hodowlanego zawierającego świeżą pożywkę. Umieść naczynie w inkubatorze ustawionym na 37°C z 5%CO2 i zmieniaj pożywkę co 2-3 dni.
Współczynnik podziału
od 1 do 5
Gęstość wysiewu
2 do 4 x 104 komórek/cm2
Odnawianie płynów
2 do 3 razy w tygodniu
Powrót do stanu sprzed rozmrożenia

Po rozmrożeniu rozdzielić komórki w stosunku 1:2 do 1:3 w kolbach T25 i pozwolić komórkom na regenerację po procesie zamrażania i przyleganie (w przypadku hodowli adherentnych) przez co najmniej 24 godziny.

Rozmrażanie i hodowla
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania
Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją.
Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

08Darczyńca

Wiek dawcy
Płód