Μετάβαση στο περιεχόμενο
HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP
Ιστός
Ενδοτράχηλος
Ασθένεια
Αδενοκαρκίνωμα
Θέση μετάστασης
Θέση πρωτογενούς όγκου (ενδοτράχηλος)
Συνώνυμα
HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP #86, HK CRISPR CAP-H-mEGFP

Έγγραφα

HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP

Cell line · Αριθμός προϊόντος 301568

Η κυτταρική σειρά HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP είναι ένα μοντέλο ανθρώπινης προέλευσης που έχει σχεδιαστεί για προηγμένες εφαρμογές γονιδιακής επεξεργασίας και φθορισμού. Αυτή η κυτταρική σειρά βασίζεται σε...

€800.00χωρίς ΦΠΑ και έξοδα αποστολής

Προσαρμογή / Προτάσεις

Σε απόθεμα
Lot
Συνιστάται (η πιο φρέσκια παρτίδα)
1

01Γενικές πληροφορίες

Περιγραφή

Η κυτταρική σειρά HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP είναι ένα μοντέλο ανθρώπινης προέλευσης που έχει σχεδιαστεί για προηγμένες εφαρμογές γονιδιακής επεξεργασίας και φθορισμού. Αυτή η κυτταρική σειρά βασίζεται σε μια γονική ανθρώπινη κυτταρική σειρά και έχει τροποποιηθεί με τη χρήση της τεχνολογίας CRISPR-Cas9 ώστε να εκφράζει ένα γονίδιο CAP-H (Chromosome-Associated Protein H) που φέρει ετικέτα με μονομερή ενισχυμένη πράσινη φθορίζουσα πρωτεΐνη (mEGFP). Αυτή η τροποποίηση επιτρέπει την ακριβή οπτικοποίηση και παρακολούθηση της CAP-H, ενός συστατικού του συμπλόκου της συμπυκνωμένης ουσίας που είναι ζωτικής σημασίας για τη συμπύκνωση και τη σταθεροποίηση του χρωμοσώματος κατά τη διάρκεια της κυτταρικής διαίρεσης. Η ετικέτα mEGFP παρέχει ένα ισχυρό και σταθερό σήμα φθορισμού, καθιστώντας αυτή την κυτταρική σειρά ιδανική για απεικόνιση ζωντανών κυττάρων και δοκιμασίες με βάση τον φθορισμό.

Η κυτταρική σειρά HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP είναι ιδιαίτερα πολύτιμη για μελέτες στη ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου, τη μίτωση και τη δυναμική των χρωμοσωμάτων. Οι ερευνητές μπορούν να χρησιμοποιήσουν αυτό το μοντέλο για να διερευνήσουν τους ρόλους των συμπλόκων κοντενσίνης στη διατήρηση της χρωμοσωμικής ακεραιότητας, ιδίως κατά τη διάρκεια κρίσιμων φάσεων όπως η μετάφαση και η ανάφαση. Η σταθερή ενσωμάτωση της ετικέτας mEGFP εξασφαλίζει συνεπή έκφραση και αξιόπιστα πειραματικά αποτελέσματα, ενισχύοντας την αναπαραγωγιμότητα σε διάφορες μελέτες.

Ιστός
Ενδοτράχηλος
Ασθένεια
Αδενοκαρκίνωμα
Θέση μετάστασης
Θέση πρωτογενούς όγκου (ενδοτράχηλος)
Εφαρμογές
Βιολογία του συμπλόκου Condensin I· απεικόνιση CAP-H· συμπύκνωση χρωμοσωμάτων· αρχιτεκτονική των μιτωτικών χρωμοσωμάτων· απεικόνιση ζωντανών κυττάρων· έρευνα του κυτταρικού κύκλου· επικύρωση knock-in με CRISPR· μελέτες χρωμοσωμικής ακεραιότητας
Συνώνυμα
  • HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP #86
  • HK CRISPR CAP-H-mEGFP

02Ταξινόμηση

Οργανισμός
Άνθρωπος
Σεξ
Γυναίκα
Ιδιότητες ανάπτυξης
Πιστός
Κατάσταση όσον αφορά τους ΓΤΟ
GMO-S1
Λεπτομέρειες σχετικά με την κατάσταση των ΓΤΟ
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-mediated mEGFP knock-in at the CAP-H locus enabling live imaging of mitotic chromatin. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Επίπεδο βιοασφάλειας
1

03Χαρακτηριστικά

Μορφολογία
Επιθηλιακά κύτταρα με ψηφιδωτό σχήμα πέτρας
Τύπος κυττάρου
Επιθηλιακά κύτταρα

04Αναγνωριστικά

Παραπομπή
HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP (αριθμός καταλόγου Cytion 301568)
Αριθμός φορολογικού μητρώου NCBI
9606
Κελλοσαύρος
CVCL_UR43
Καταθέτης
Εργαστήριο Ellenberg (EMBL)

05Έκφραση και ευαισθησία

Προϊόντα
EGFP (ενισχυμένη πράσινη φθορίζουσα πρωτεΐνη)

06Χειρισμός και καλλιέργεια

Θρεπτικό μέσο
DMEM, w: 4,5 g/L γλυκόζη, w: 4 mM L-γλουταμίνη, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM πυρουβικό νάτριο (αριθμός άρθρου Cytion 820300a)
Ατμόσφαιρα επώασης

37°C, 5%CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

Συμπληρώματα
Συμπληρώστε το μέσο με 10% FBS
Αντιδραστήριο αποσύνδεσης
Accutase
Αναπαραγωγή σε υποκαλλιέργεια
Αφαιρέστε το παλιό μέσο από τα προσκολλημένα κύτταρα και πλύντε τα με PBS που δεν περιέχει ασβέστιο και μαγνήσιο. Για φιάλες T25, χρησιμοποιήστε 3-5 ml PBS και για φιάλες T75, χρησιμοποιήστε 5-10 ml. Στη συνέχεια, καλύψτε πλήρως τα κύτταρα με Accutase, χρησιμοποιώντας 1-2 ml για φιάλες T25 και 2,5 ml για φιάλες T75. Αφήστε τα κύτταρα να επωαστούν σε θερμοκρασία δωματίου για 8-10 λεπτά για να αποκολληθούν. Μετά την επώαση, αναμείξτε απαλά τα κύτταρα με 10 ml μέσου για να ανασυσταθούν και, στη συνέχεια, φυγοκεντρίστε στα 300xg για 3 λεπτά. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό, ανασυστάστε τα κύτταρα σε φρέσκο μέσο και μεταφέρετέ τα σε νέες φιάλες που περιέχουν ήδη φρέσκο μέσο.
Ανανέωση υγρών
2 έως 3 φορές την εβδομάδα
Απόψυξη και καλλιέργεια
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Έλεγχος ποιότητας και κρυοσυντήρηση

Στειρότητα

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Μέσο κατάψυξης
Ως μέσο κρυοσυντήρησης, χρησιμοποιούμε πλήρες μέσο ανάπτυξης (συμπεριλαμβανομένου του FBS) + 10% DMSO για επαρκή βιωσιμότητα μετά την απόψυξη, ή CM-1 (αριθμός καταλόγου Cytion 800100), το οποίο περιλαμβάνει βελτιστοποιημένα ωσμοπροστατευτικά και μεταβολικούς σταθεροποιητές για την ενίσχυση της ανάκαμψης και τη μείωση του στρες που προκαλείται από την κρυοσυντήρηση.
Συνθήκες αποθήκευσης

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Όροι αποστολής

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

08Δωρητής

Ηλικία δωρητή
30 χρόνια
Εθνικότητα
Αφροαμερικανός