Mine otse sisu juurde
HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP
Kude
Endocervix
Haigus
Adenokartsinoom
Metastaaside asukoht
Esmane kasvaja asukoht (emaka kaela sisemine osa)
Sünonüümid
HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP #86, HK CRISPR CAP-H-mEGFP

Dokumendid

HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP

Cell line · Toote number 301568

Rakuliin HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP on inimestelt pärinev mudel, mis on loodud keerukate geeniredigeerimise ja fluorestsentsrakenduste jaoks. See rakuliin põhineb...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
1

01Üldine teave

Kirjeldus

HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP rakuliin on inimesest saadud mudel, mis on loodud täiustatud geenitöötluse ja fluorestsentseerimise rakenduste jaoks. See rakuliin põhineb inimese vanemrakuliinil ja seda on muudetud CRISPR-Cas9 tehnoloogia abil, et ekspresseerida CAP-H (kromosoomiga seotud valk H) geeni, mis on märgistatud monomeerse tõhustatud rohelise fluorestseeruva valguga (mEGFP). See modifikatsioon võimaldab kromosoomi kondenseerumise ja stabiliseerumise seisukohalt olulise kromosoomikompleksi CAP-H täpset visualiseerimist ja jälgimist raku jagunemise ajal. MEGFP-märgis annab tugeva ja stabiilse fluorestsentsisignaali, mis muudab selle rakuliini ideaalseks elusraku kujutamiseks ja fluorestsentsil põhinevateks analüüsideks.

HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP rakuliin on eriti väärtuslik rakutsükli reguleerimise, mitoosi ja kromosoomide dünaamika uurimiseks. Teadlased saavad seda mudelit kasutada, et uurida kondensiinikomplekside rolli kromosoomi terviklikkuse säilitamisel, eriti kriitilistes faasides, nagu metafaas ja anafaas. MEGFP-märgise stabiilne integreerimine tagab järjepideva ekspressiooni ja usaldusväärsed katsetulemused, mis parandab reprodutseeritavust erinevates uuringutes.

Kude
Endocervix
Haigus
Adenokartsinoom
Metastaaside asukoht
Esmane kasvaja asukoht (emaka kaela sisemine osa)
Rakendused
Condensin I kompleksi bioloogia; CAP-H-pildistamine; kromosoomide kondensatsioon; mitootiliste kromatiidide struktuur; elusrakkude pildistamine; rakutsükli uurimine; CRISPR-knock-in-meetodi valideerimine; kromosoomide terviklikkuse uuringud
Sünonüümid
  • HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP #86
  • HK CRISPR CAP-H-mEGFP

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Naine
Kasvuvõime
Järgija
GMO-staatus
GMO-S1
GMO-staatuse üksikasjad
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-mediated mEGFP knock-in at the CAP-H locus enabling live imaging of mitotic chromatin. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed rakud, millel on mosaiikne kivikuju
Rakutüüp
Epiteelirakud

04Tunnused

Viide
HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP (Cytioni katalooginumber 301568)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_UR43
Hoiustaja
Ellenbergi labor (EMBL)

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Tooted
EGFP (tõhustatud roheline fluorestseeruv valk)

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM, w: 4,5 g/L glükoosi, w: 4 mM L-glutamiini, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM naatriumpüruvaati (Cytioni artikli number 820300a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
30 aastat
Etniline kuuluvus
Afroameeriklane