- Tessuto
- Endocervice
- Malattia
- Adenocarcinoma
- Sito metastatico
- Sede del tumore primario (endocervice)
- Sinonimi
- HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP #86, HK CRISPR CAP-H-mEGFP
Documenti
HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP
Cell line · Codice prodotto 301568
La linea cellulare HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP è un modello di origine umana progettato per applicazioni avanzate di editing genetico e fluorescenza. Questa linea cellulare si basa su...
Personalizzazione / Suggerimenti
- HK-CRISPR-CAP-H-mEGFPCell line€800.00
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01Informazioni generali
- Descrizione
La linea cellulare HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP è un modello di derivazione umana ingegnerizzato per applicazioni avanzate di editing genico e fluorescenza. Questa linea cellulare si basa su una linea cellulare umana parentale ed è stata modificata con la tecnologia CRISPR-Cas9 per esprimere un gene CAP-H (Chromosome-Associated Protein H) marcato con la proteina fluorescente verde potenziata monomerica (mEGFP). Questa modifica consente di visualizzare e seguire con precisione CAP-H, un componente del complesso della condensina, fondamentale per la condensazione e la stabilizzazione dei cromosomi durante la divisione cellulare. Il tag mEGFP fornisce un segnale di fluorescenza forte e stabile, rendendo questa linea cellulare ideale per l'imaging di cellule vive e per saggi basati sulla fluorescenza.
La linea cellulare HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP è particolarmente preziosa per gli studi sulla regolazione del ciclo cellulare, sulla mitosi e sulla dinamica cromosomica. I ricercatori possono utilizzare questo modello per studiare il ruolo dei complessi di condensina nel mantenimento dell'integrità cromosomica, soprattutto durante fasi critiche come la metafase e l'anafase. L'integrazione stabile del tag mEGFP garantisce un'espressione coerente e risultati sperimentali affidabili, migliorando la riproducibilità in diversi studi.
- Tessuto
- Endocervice
- Malattia
- Adenocarcinoma
- Sito metastatico
- Sede del tumore primario (endocervice)
- Applicazioni
- Biologia del complesso condensina I; imaging CAP-H; condensazione cromosomica; architettura dei cromatidi mitotici; imaging su cellule vive; ricerca sul ciclo cellulare; validazione del knock-in CRISPR; studi sull’integrità cromosomica
- Sinonimi
- HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP #86
- HK CRISPR CAP-H-mEGFP
02Classificazione
- Organismo
- Umano
- Sesso
- Donna
- Proprietà di crescita
- Aderente
- Presenza di OGM
- GMO-S1
- Dettagli sullo stato degli OGM
- GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-mediated mEGFP knock-in at the CAP-H locus enabling live imaging of mitotic chromatin. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Livello di biosicurezza
- 1
03Caratteristiche
- Morfologia
- Cellule simili a quelle epiteliali con forma di pietra a mosaico
- Tipo di cellula
- Cellule epiteliali
04Identificatori
- Riferimento bibliografico
- HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP (numero di catalogo Cytion 301568)
- Codice fiscale NCBI
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_UR43
- Depositario
- Il laboratorio Ellenberg (EMBL)
05Espressione e suscettibilità
- Prodotti
- EGFP (proteina verde fluorescente potenziata)
06Manipolazione e coltura
- Terreno di coltura
- DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
- Atmosfera di incubazione
37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.
- Integratori
- Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
- Reagente di dissociazione
- Accutase
- Subcoltura
- Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
- Rinnovo dei fluidi
- da 2 a 3 volte alla settimana
- Scongelamento e coltura
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Controllo di qualità e crioconservazione
- Sterilità
La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.
Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.
- Terreno di coltura congelato
- Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
- Condizioni di conservazione
Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.
- Condizioni di spedizione
Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.
08Donatore
- Età dei donatori
- 30 anni
- Etnia
- Afroamericano
09Aspetti legali e di sicurezza
- Misure di sicurezza
- Quando si prevede di conservare una crioviale in azoto liquido per un futuro scongelamento, è obbligatorio attenersi a rigorose misure di sicurezza. Guanti e indumenti protettivi appropriati sono essenziali e l'uso di una maschera facciale o di occhiali di sicurezza è richiesto durante il trasferimento dei campioni congelati da o verso il serbatoio di azoto liquido. Questo per ridurre il rischio di lesioni dovute a potenziali esplosioni di crioviali al momento della rimozione, che possono provocare la proiezione di frammenti taglienti.
- Garanzia
Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto
Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia
- Si applicano gli accordi con terze parti
- Sì