Перейти до вмісту
HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP
Тканина
Ендоцервікс
Хвороба
Аденокарцинома
Місце метастазування
Локалізація первинної пухлини (ендоцервікс)
Синоніми
HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP #86, HK CRISPR CAP-H-mEGFP

Документи

HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP

Cell line · Номер товару 301568

Клітинна лінія HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP — це модель, створена на основі людських клітин, призначена для передових методів редагування генів та флуоресцентних досліджень. Ця клітинна лінія базується на...

€800.00без урахування податків та вартості доставки
Є в наявності
Лот
Рекомендовано (найсвіжіша партія)
1

01Загальна інформація

Опис

Клітинна лінія HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP - це модель, отримана від людини, створена для вдосконаленого редагування генів та застосування флуоресценції. Ця клітинна лінія створена на основі батьківської лінії клітин людини і модифікована за допомогою технології CRISPR-Cas9 для експресії гена CAP-H (хромосомно-асоційованого білка H), міченого мономерним посиленим зеленим флуоресцентним білком (mEGFP). Ця модифікація дозволяє точно візуалізувати та відстежувати CAP-H, компонент комплексу конденсину, який має вирішальне значення для конденсації та стабілізації хромосом під час клітинного поділу. Мітка mEGFP забезпечує сильний і стабільний флуоресцентний сигнал, що робить цю клітинну лінію ідеальною для візуалізації живих клітин і аналізу на основі флуоресценції.

Клітинна лінія HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP особливо цінна для вивчення регуляції клітинного циклу, мітозу та хромосомної динаміки. Дослідники можуть використовувати цю модель для вивчення ролі конденсинових комплексів у підтримці хромосомної цілісності, особливо під час критичних фаз, таких як метафаза та анафаза. Стабільна інтеграція мітки mEGFP забезпечує послідовну експресію та надійні експериментальні результати, покращуючи відтворюваність у різних дослідженнях.

Тканина
Ендоцервікс
Хвороба
Аденокарцинома
Місце метастазування
Локалізація первинної пухлини (ендоцервікс)
Застосування
Біологія комплексу конденсину I; візуалізація CAP-H; конденсація хромосом; архітектура мітотичних хроматид; візуалізація живих клітин; дослідження клітинного циклу; верифікація нок-ін-мутацій за допомогою CRISPR; дослідження цілісності хромосом
Синоніми
  • HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP #86
  • HK CRISPR CAP-H-mEGFP

02Класифікація

Організм
Людина
Секс
Жінка
Характеристики росту
Прихильник
Статус ГМО
GMO-S1
Детальна інформація щодо статусу ГМО
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-mediated mEGFP knock-in at the CAP-H locus enabling live imaging of mitotic chromatin. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Рівень біобезпеки
1

03Характеристики

Морфологія
Епітеліоподібні клітини з формою мозаїчного каменю
Тип клітини
Епітеліальні клітини

04Ідентифікатори

Посилання
HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP (номер за каталогом Cytion 301568)
Ідентифікаційний номер платника податків NCBI
9606
Целозавр
CVCL_UR43
Вкладник
Лабораторія Елленберга (EMBL)

05Експресія та сприйнятливість

Продукція
EGFP (розширений зелений флуоресцентний білок)

06Обробка та вирощування

Живильне середовище
ДМЕМ, w: 4,5 г/л Глюкоза, w: 4 мМ L-глутамін, w: 3,7 г/л NaHCO3, w: 1,0 мМ піруват натрію (цит. номер 820300a)
Атмосфера інкубації

37°C, 5% CO2, волога атмосфера.

Добавки
Додайте до середовища 10% FBS
Реагент для дисоціації
Аккутаза
Пересадка в нове середовище
Видаліть старе середовище з прилиплих клітин і промийте їх PBS, в якому бракує кальцію і магнію. Для колб T25 використовуйте 3-5 мл PBS, а для колб T75 - 5-10 мл. Потім повністю покрийте клітини аккутазою, використовуючи 1-2 мл для колб Т25 і 2,5 мл для колб Т75. Залиште клітини інкубуватися при кімнатній температурі протягом 8-10 хвилин, щоб відокремити їх. Після інкубації обережно змішайте клітини з 10 мл середовища, щоб ресуспендувати їх, а потім центрифугуйте при 300xg протягом 3 хвилин. Викиньте надосадову рідину, ресуспендуйте клітини у свіжому середовищі та перенесіть їх у нові колби, які вже містять свіже середовище.
Оновлення рідини
2-3 рази на тиждень
Розморожування та культивування
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Контроль якості та кріоконсервація

Стерильність

Зараження мікоплазмою виключається за допомогою аналізів на основі ПЛР та люмінесцентних методів виявлення мікоплазми.

Щоб переконатися у відсутності бактеріального, грибкового або дріжджового забруднення, клітинні культури піддаються щоденному візуальному контролю.

Середовище для заморожування
Як середовище кріоконсервування ми використовуємо повне живильне середовище (включаючи FBS) + 10% ДМСО для адекватної життєздатності після відтавання або CM-1 (номер за каталогом Cytion 800100), до складу якого входять оптимізовані осмопротектори та метаболічні стабілізатори для прискорення відновлення та зменшення кріоіндукованого стресу.
Умови зберігання

Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот.

Умови доставки

Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і без зволікань перемістіть флакони у відповідне місце зберігання.

08Донор

Вік донора
30 років
Етнічна приналежність
Афроамериканець