Siirry sisältöön
MHH-ES1-solut
Kudos
Luu
Sairaus
Ewingin sarkooma
Metastaasikohde
Askites
Synonyymit
MHH-ES-1, MHHES1

Asiakirjat

MHH-ES1-solut

Cell line · Tuotenumero 300136

MHH-ES1-solulinja on peräisin potilaalta, jolla oli Ewingin sarkooma, erittäin aggressiivinen luu- ja pehmytkudossyöpä, joka esiintyy pääasiassa lapsilla ja nuorilla...

€430.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

MHH-ES1-solulinja on peräisin potilaalta, jolla on Ewingin sarkooma, erittäin aggressiivinen luu- ja pehmytkudossyöpä, joka vaikuttaa pääasiassa lapsiin ja nuoriin aikuisiin. Tämä solulinja on arvokas malli Ewingin sarkooman taustalla olevien molekyylimekanismien tutkimiseen, erityisesti tälle syöpätyypille ominaisen EWSR1-FLI1-fuusiogeenin roolin tutkimiseen. Fuusiogeeni on seurausta kromosomien 11 ja 22 välisestä translokaatiosta, joka johtaa onkogeenisen transkriptiotekijän tuotantoon, joka ohjaa kasvainten syntyä. MHH-ES1:tä, kuten muitakin Ewingin sarkooman solulinjoja, käytetään EWSR1-FLI1:n vaikutuksen alaisina olevien reittien, kuten solujen proliferaation, erilaistumisen ja apoptoosin muutosten, tutkimiseen.

Tutkijat käyttävät MHH-ES1-solulinjaa arvioidakseen erilaisten sellaisten terapeuttisten aineiden tehoa, jotka kohdistuvat Ewingin sarkooman eloonjäämisen ja lisääntymisen kannalta kriittisiin reitteihin. Sitä käytetään esimerkiksi testattaessa pieniä molekyyli-inhibiittoreita, RNA-interferenssiä ja CRISPR-Cas9-geenieditointitekniikoita, joilla pyritään häiritsemään EWSR1-FLI1-fuusiogeeniä tai sen myöhempiä vaikuttajia. Lisäksi MHH-ES1 toimii mallina, jonka avulla tutkitaan perinteisen kemoterapian resistenssimekanismeja ja tunnistetaan uusia biomarkkereita varhaisdiagnoosia ja hoitovasteen seurantaa varten Ewingin sarkoomapotilailla.

Kudos
Luu
Sairaus
Ewingin sarkooma
Metastaasikohde
Askites
Synonyymit
  • MHH-ES-1
  • MHHES1

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Mies
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Pienet pyöreät solut

04Tunnisteet

Lähdeviite
MHH-ES1 (Cytionin luettelonumero 300136)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_1411

05Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilia glutamiinia, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820700a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Kylvötiheys
1–2 x 104 solua/cm2
Nesteen uusiminen
3-5 päivän välein
Sulamisen jälkeinen palautuminen
Sulattamisen jälkeen levitä solut 5 x 104 solua/cm2 ja anna solujen toipua pakastusprosessista ja kiinnittyä vähintään 24 tunnin ajan.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

07Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
12 vuotta
Etnisyys
Turkkilainen