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Cellule MHH-ES1
Tessuto
Osso
Malattia
Sarcoma di Ewing
Sito metastatico
Ascite
Sinonimi
MHH-ES-1, MHHES1

Documenti

Cellule MHH-ES1

Cell line · Codice prodotto 300136

La linea cellulare MHH-ES1 deriva da un paziente affetto da sarcoma di Ewing, un tumore altamente aggressivo delle ossa e dei tessuti molli che colpisce prevalentemente bambini e...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare MHH-ES1 deriva da un paziente affetto da sarcoma di Ewing, un tumore altamente aggressivo delle ossa e dei tessuti molli che colpisce prevalentemente bambini e giovani adulti. Questa linea cellulare è un modello prezioso per studiare i meccanismi molecolari alla base del sarcoma di Ewing, in particolare il ruolo del gene di fusione EWSR1-FLI1, caratteristico di questo tipo di tumore. Il gene di fusione deriva da una traslocazione tra i cromosomi 11 e 22, che porta alla produzione di un fattore di trascrizione oncogeno che guida la tumorigenesi. MHH-ES1, come altre linee cellulari di sarcoma di Ewing, viene utilizzato per studiare le vie influenzate da EWSR1-FLI1, comprese le alterazioni della proliferazione, della differenziazione e dell'apoptosi delle cellule.

I ricercatori utilizzano la linea cellulare MHH-ES1 per valutare l'efficacia di vari agenti terapeutici che mirano a percorsi critici per la sopravvivenza e la proliferazione del sarcoma di Ewing. Ad esempio, è utile per testare inibitori di piccole molecole, interferenza dell'RNA e tecniche di editing genico CRISPR-Cas9 volte a interrompere il gene di fusione EWSR1-FLI1 o i suoi effettori a valle. Inoltre, MHH-ES1 serve come modello per studiare i meccanismi di resistenza alla chemioterapia convenzionale e per identificare nuovi biomarcatori per la diagnosi precoce e il monitoraggio della risposta al trattamento nei pazienti affetti da sarcoma di Ewing.

Tessuto
Osso
Malattia
Sarcoma di Ewing
Sito metastatico
Ascite
Sinonimi
  • MHH-ES-1
  • MHHES1

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Piccole cellule rotonde

04Identificatori

Riferimento bibliografico
MHH-ES1 (numero di catalogo Cytion 300136)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1411

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
Da 1 a 2 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
Ogni 3-5 giorni
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
12 anni
Etnia
Turco