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Células MHH-ES1
Tecido
Osso
Doença
Sarcoma de Ewing
Local da metástase
Ascite
Sinónimos
MHH-ES-1, MHHES1

Documentos

Células MHH-ES1

Cell line · Número do produto 300136

A linha celular MHH-ES1 é derivada de um doente com sarcoma de Ewing, um cancro dos ossos e dos tecidos moles altamente agressivo que afeta predominantemente crianças e...

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular MHH-ES1 é derivada de um doente com sarcoma de Ewing, um cancro altamente agressivo dos ossos e dos tecidos moles que afecta predominantemente crianças e jovens adultos. Esta linha celular constitui um modelo valioso para o estudo dos mecanismos moleculares subjacentes ao sarcoma de Ewing, nomeadamente o papel do gene de fusão EWSR1-FLI1, que é caraterístico deste tipo de cancro. O gene de fusão resulta de uma translocação entre os cromossomas 11 e 22, levando à produção de um fator de transcrição oncogénico que impulsiona a tumorigénese. A MHH-ES1, tal como outras linhas celulares de sarcoma de Ewing, é utilizada para investigar as vias influenciadas pelo EWSR1-FLI1, incluindo alterações na proliferação, diferenciação e apoptose celulares.

Os investigadores utilizam a linha celular MHH-ES1 para avaliar a eficácia de vários agentes terapêuticos que têm como alvo vias críticas para a sobrevivência e proliferação do sarcoma de Ewing. Por exemplo, é fundamental para testar inibidores de pequenas moléculas, interferência de RNA e técnicas de edição de genes CRISPR-Cas9 destinadas a interromper o gene de fusão EWSR1-FLI1 ou os seus efectores a jusante. Além disso, o MHH-ES1 serve de modelo para estudar os mecanismos de resistência à quimioterapia convencional e para identificar novos biomarcadores para o diagnóstico precoce e a monitorização da resposta ao tratamento em doentes com sarcoma de Ewing.

Tecido
Osso
Doença
Sarcoma de Ewing
Local da metástase
Ascite
Sinónimos
  • MHH-ES-1
  • MHHES1

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Masculino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
Pequenas células redondas

04Identificadores

Referência
MHH-ES1 (número de catálogo Cytion 300136)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1411

05Manuseamento e cultura

Meio de cultura
RPMI 1640, com: 2,0 mM de glutamina estável, com: 2,0 g/L NaHCO3 (número de artigo Cytion 820700a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
1 a 2 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
A cada 3 a 5 dias
Recuperação após o descongelamento
Após o descongelamento, coloque as células em placas a uma densidade de 5 x 104 células/cm² e deixe-as recuperar do processo de congelamento e aderir durante pelo menos 24 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

07Doador

Idade do dador
12 anos
Etnia
Turco