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A875
Tessuto
La pelle
Malattia
Melanoma
Sinonimi
A-875

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A875

Cell line · Codice prodotto 305099

The A875 cell line is a human melanoma cell line derived from a metastatic site in a 40-year-old female. Exhibiting morphological and growth characteristi...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare A875 è una linea cellulare di melanoma umano derivata da un sito metastatico di una donna di 40 anni. Presentando caratteristiche morfologiche e di crescita tipiche del melanoma maligno, la linea A875 è stata ampiamente utilizzata nella ricerca oncologica, con particolare attenzione alla biologia del melanoma, ai meccanismi di metastasi e alla resistenza terapeutica. Questa linea cellulare è caratterizzata da una crescita aggressiva e da un potenziale metastatico che la rendono un modello eccellente per gli studi in vivo sulla crescita del tumore e sulle metastasi negli xenotrapianti.

Le cellule A875 sono particolarmente preziose per studiare i fondamenti molecolari e genetici della progressione del melanoma. La ricerca che coinvolge questa linea cellulare comprende studi sul ruolo degli oncogeni, dei geni soppressori del tumore e di varie vie di segnalazione che sono fondamentali nello sviluppo e nella progressione del cancro. La linea cellulare è stata utilizzata per la valutazione di nuovi agenti chemioterapici e terapie mirate, grazie alle sue alterazioni genetiche che imitano quelle riscontrate nei melanomi umani. Inoltre, A875 è un modello chiave per la valutazione dei meccanismi di risposta immunitaria al melanoma, grazie alla sua capacità di suscitare forti reazioni immunitarie, favorendo così lo sviluppo e la sperimentazione di nuove immunoterapie.

Tessuto
La pelle
Malattia
Melanoma
Sinonimi
  • A-875

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Poligonale

04Identificatori

Riferimento bibliografico
A875 (numero di catalogo Cytion 305099)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_4733

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
40 anni