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CHO
Tessuto
Ovaio
Sinonimi
Chinese Hamster Ovary, CHO-ori

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CHO

Cell line · Codice prodotto 603479

Chinese hamster ovary (CHO) cells are a cornerstone in the field of biotechnology and are heavily utilized in the process of CHO cell line development for...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule dell'ovaio di criceto cinese (CHO) sono una pietra miliare nel campo delle biotecnologie e sono molto utilizzate nel processo di sviluppo di linee cellulari CHO per la produzione di biofarmaci. Questi includono anticorpi monoclonali, espressione di anticorpi ricombinanti e vaccini. I numerosi vantaggi delle cellule CHO sottolineano la loro popolarità nella produzione di biomateriali e le rendono una linea cellulare animale robusta e versatile con una comprovata esperienza in genetica, biologia molecolare, screening della tossicità, nutrizione e studi di espressione genica.

Il contributo delle cellule CHO all'industria biofarmaceutica è immenso e il loro ruolo nello sviluppo di anticorpi ricombinanti e nella produzione di anticorpi monoclonali è particolarmente significativo. Quasi 50 bioterapici sviluppati con queste cellule sono stati approvati negli Stati Uniti e nell'Unione Europea, il che dimostra l'efficacia delle cellule CHO e il loro ruolo integrale nello sviluppo degli anticorpi. La loro origine di criceto contribuisce a ridurre la suscettibilità ai virus, migliorando la biosicurezza negli ambienti di biolaborazione e riducendo la variazione da lotto a lotto.

Le cellule CHO sono adatte a produrre proteine che subiscono modifiche post-traduzionali, un aspetto fondamentale per la produzione di proteine terapeutiche. La versatilità delle cellule derivate dall'ovaio di criceto cinese è ulteriormente evidenziata dai loro rapidi tassi di proliferazione e dagli elevati tassi di espressione proteica, pari a 1-5 grammi per litro di coltura. La facilità di coltivazione delle cellule CHO e la loro capacità di essere geneticamente modificate rendono le cellule CHO una scelta ottimale per studi di espressione sia transitori che stabili.

La linea cellulare CHO-K1, un derivato delle cellule originali dell'ovaio di criceto cinese (CHO), è spesso utilizzata per esprimere proteine ricombinanti, in particolare per la produzione di proteine terapeutiche e anticorpi ricombinanti. Esse eccellono nella produzione di proteine terapeutiche e anticorpi grazie all'efficiente modificazione post-traduzionale, in particolare la glicosilazione. I ricercatori modificano le cellule CHO-K1 per migliorare l'espressione delle proteine e personalizzare la glicosilazione per terapie specifiche, fondamentali in biomedicina.

In conclusione, la linea cellulare dell'ovaio di criceto cinese, nota per la sua notevole capacità di imitare le modificazioni post-traduzionali umane, è una risorsa scientifica inestimabile. Sia che si tratti di superare la difficoltà di esprimere proteine difficili o di produrre anticorpi monoclonali, le cellule CHO hanno rivoluzionato lo sviluppo e la produzione di terapie proteiche ricombinanti. Esse rimangono fondamentali nella medicina moderna, fungendo da pietra miliare per la produzione biofarmaceutica e riflettendo i progressi della biotecnologia.

Tessuto
Ovaio
Applicazioni
Questa linea cellulare è una scelta ottimale per la tossicologia, la biotecnologia industriale e la bioproduzione.
Sinonimi
  • Chinese Hamster Ovary
  • CHO-ori

02Classificazione

Organismo
Criceto cinese
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio

04Identificatori

Riferimento bibliografico
CHO (catalogo Cytion numero 603479)
Codice fiscale NCBI
10029
Cellosaurus
CVCL_0213

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
Ham's F12, w: 1,0 mM di glutammina stabile, w: 1,0 mM di piruvato di sodio, w: 1,1 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820600a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
3 x 104 cellule/cm2 produrranno uno strato confluente in circa 4 giorni.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
Adulti

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