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CHO-K1
Tessuto
Ovaio
Sinonimi
CHO K1, CHOK1, CHO cell clone K1, GM15452

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CHO-K1

Cell line · Codice prodotto 603480

CHO-K1 cells are a subline derived from the CHO cell line, which was originally established in the early 1950s from a Chinese hamster ovary. CHO-K1 cells ...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule CHO-K1 sono una sotto-linea derivata dalla linea cellulare CHO, che è stata originariamente creata nei primi anni '50 a partire da un ovaio di criceto cinese. Le cellule CHO-K1 sono ampiamente utilizzate nella produzione di anticorpi monoclonali terapeutici e altri biofarmaci. Il loro ampio utilizzo nella produzione di proteine e vaccini biofarmaceutici è attribuito alla loro natura eucariotica, che consente un corretto ripiegamento, assemblaggio e modifiche post-traslazionali come la glicosilazione, che influenza la stabilità, l'efficacia e la sicurezza delle proteine prodotte.

Nel campo della produzione di proteine ricombinanti, la linea cellulare CHO-K1 viene utilizzata per esprimere un'ampia gamma di proteine, tra cui anticorpi monoclonali, fattori di crescita, citochine ed enzimi. Queste proteine trovano applicazione in trattamenti terapeutici, test diagnostici e formulazioni di vaccini.

Le cellule CHO-K1 presentano un tasso di crescita robusto e sono adattabili a varie condizioni di coltura, comprese quelle in sospensione e aderenti, il che le rende molto utili per i processi di bioproduzione su larga scala. Possiedono un elevato livello di stabilità genetica e sono utilizzate per lo sviluppo di linee cellulari stabili, in quanto sono in grado di amplificare ed esprimere in modo efficiente i geni esogeni, il che è fondamentale per produrre elevate rese di proteine ricombinanti.

Le cellule CHO-K1 di criceto cinese possono essere facilmente trasfettate con una varietà di vettori per l'espressione genica, facilitando l'editing o il knockdown genico. Questa flessibilità consente ai ricercatori di introdurre geni specifici, silenziare geni o persino eseguire un editing genico mirato utilizzando tecnologie come CRISPR-Cas9 nelle cellule ospiti CHO-K1.

In conclusione, le cellule CHO-K1 di criceto cinese e le cellule CHO sono fondamentali per la ricerca biotecnologica e la produzione biofarmaceutica, in quanto offrono una piattaforma versatile per lo studio della funzione genica e la produzione su larga scala di proteine ricombinanti.

Tessuto
Ovaio
Applicazioni
Questa linea cellulare è una scelta ottimale per la tossicologia, la biotecnologia industriale e la bioproduzione.
Sinonimi
  • CHO K1
  • CHOK1
  • CHO cell clone K1
  • GM15452

02Classificazione

Organismo
Criceto cinese
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Cariotipo
Distribuzione della frequenza cromosomica 50 cellule: 2n = 22. Il numero di staminali è ipodiploide
Tempo di raddoppio
22 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
CHO-K1 (catalogo Cytion numero 603480)
Codice fiscale NCBI
10029
Cellosaurus
CVCL_0214

05Espressione e suscettibilità

Suscettibilità ai virus
Stomatite vescicolare (Indiana), Getah virus Virus Resist: poliovirus 2, modoc virus, Button Willow virus
Trascriptasi inversa
Negativo

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
Ham's F12, w: 1,0 mM di glutammina stabile, w: 1,0 mM di piruvato di sodio, w: 1,1 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820600a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1 x 104 cellule/cm2 produrrà uno strato confluente in circa 6 giorni
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
Adulti