Pāriet uz saturu
RD
Audums
Embrionālais
Slimība
Rabdomiosarkoma
Metastāžu vieta
Neattiecas (embrijālā rabdomiosarkoma; šūnu līnija iegūta no embrionālā auda, nevis no metastātiska parauga)
Sinonīmi
R D, RD-2, RD 2, 130T, 130-T, 130 T, TE-32, TE 32, TE32, TE 32.T, Te 32.T

Dokumenti

RD

Cell line · Preces numurs 300401

This line has recently been shown to be at least parental, if not identical, to TE-671.

€430.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts
Nesen tika pierādīts, ka šī līnija ir vismaz radniecīga, ja ne identiska TE-671.
Audums
Embrionālais
Slimība
Rabdomiosarkoma
Metastāžu vieta
Neattiecas (embrijālā rabdomiosarkoma; šūnu līnija iegūta no embrionālā auda, nevis no metastātiska parauga)
Pieteikumi
Rabdomiosarkomas pētījumi; bērnu sarkomu bioloģija; skeleta muskuļu diferenciācijas pētījumi; jutība pret zālēm (vinkristīns, daktinomicīns, ciklofosfamīds); miogēno transkripcijas faktoru analīze; vīrusu uzņēmības testi
Sinonīmi
  • R D
  • RD-2
  • RD 2
  • 130T
  • 130-T
  • 130 T
  • TE-32
  • TE 32
  • TE32
  • TE 32.T
  • Te 32.T

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
ĢMO statuss
Bez ĢMO
Sīkāka informācija par ĢMO statusu
No genetic modification; parental RD rhabdomyosarcoma line. Note: TE-671 derivative status does not imply engineering; both lines are naturally occurring tumors.
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Jaukta (vārpstveida šūnas un lielas daudzkodolu šūnas)
Šūnu tips
Verpstveida šūnas un lielas daudzkodolu šūnas
Kariotips
2n=48
Laiks, kas nepieciešams, lai skaits dubultojās
aptuveni 24 līdz 36 stundas

04Identifikatori

Atsauce
RD (Cytion kataloga numurs 300401)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_1649

05Pazīmes un uzņēmība

Izoenzīmi
G6PD, B
Jutība pret vīrusiem
Poliovīruss 1, vezikulārais stomatīts (Indiana), herpes simplex, vakcīnija
Reversā transkriptāze
Negatīvs
Produkti
Mioglobīns, miozīna ATPāze

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM, w: 4,5 g/l glikozes, w: 4 mM L-glutamīna, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM nātrija piruvāta (Cytion izstrādājuma numurs 820300a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sadalījuma attiecība
no 1 līdz 3
Sēšanas blīvums
1 līdz 3 × 10⁴ šūnas/cm²
Šķidruma atjaunošana
Ik pēc 3 līdz 4 dienām
Atgūšanās pēc atkusņa
Pēc atkausēšanas izsējiet šūnas blīvumā 5 × 10⁴ šūnas/cm² un pirms pirmās barotnes nomaiņas ļaujiet tām vismaz 24 stundas pielipt.
Atkausēšana un kultivēšana

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
Embrijs
Etniskā piederība
Kaukāzietis