MDS-L

A MDS-L é uma linhagem celular derivada da síndrome mielodisplásica (MDS) humana, originalmente estabelecida a partir da linhagem celular MDS92, que, por sua vez, foi derivada da medula óssea de um paciente com MDS que apresentava uma anomalia cromossômica do tipo del(5q). Enquanto a MDS92 continha uma mistura heterogênea de células mieloides em diferentes estágios de diferenciação, a MDS-L representa uma sublinha blástica com características mais uniformes, típicas de células progenitoras mieloides imaturas. A MDS-L mantém a dependência da interleucina-3 (IL-3) para proliferação in vitro, refletindo a sensibilidade às citocinas observada nas células progenitoras primárias da SMD. A linhagem abriga múltiplas alterações genéticas, incluindo mutações homozigotas no TP53 e mutações adquiridas adicionais nos genes NRAS e CEBPA. Essas alterações, coletivamente, refletem a evolução clonal e o potencial de transformação leucêmica típicos da SMD de alto risco.

A MDS-L tem sido amplamente utilizada como modelo para investigar os mecanismos moleculares subjacentes à patogênese da MDS, ao bloqueio da diferenciação e à resistência terapêutica. Uma descoberta significativa utilizando a MDS-L foi a demonstração de que a expressão forçada do receptor do fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSFR) por meio de transdução retroviral possibilitou a diferenciação granulocítica após estimulação com G-CSF. Isso foi evidenciado por alterações morfológicas, aumento da expressão de CD11b e aumento da atividade de redução do nitroazul de tetrazólio (NBT) — indicativos da maturação terminal dos granulócitos. Esses resultados revelaram a capacidade intrínseca da MDS-L de se diferenciar caso os componentes de sinalização apropriados sejam restaurados, oferecendo insights sobre possíveis abordagens de terapia gênica direcionadas aos defeitos de diferenciação na MDS.

Além de estudos genéticos e funcionais, a MDS-L tem sido fundamental para caracterizar o papel das modificações de histonas na progressão da doença. Notavelmente, a mutação da histona H3-K27M, comumente associada a gliomas pediátricos, mas rara em neoplasias hematológicas, foi identificada na MDS-L e verificou-se que inibe a metilação de histonas mediada por EZH2. Essa alteração epigenética levou a uma redução generalizada na metilação de H3-K27 e foi associada à alteração na expressão de genes supressores de tumor, como o p16. Sublinhagens de MDS-L com ou sem essa mutação — derivadas de condições diferenciais de cultura com IL-3 — permitiram ainda a exploração da heterogeneidade epigenética dentro da MDS e suas implicações para o crescimento dependente de IL-3 e a resposta terapêutica. Essas propriedades únicas tornam a MDS-L um poderoso modelo in vitro e in vivo para o estudo da evolução molecular e do direcionamento terapêutico da MDS e de sua transformação em leucemia mieloide aguda.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.