MDS-L

MDS-L je ľudská bunková línia odvodená od myelodysplastického syndrómu (MDS), pôvodne vytvorená z bunkovej línie MDS92, ktorá bola odvodená z kostnej drene pacienta s MDS vykazujúcim chromozómovú abnormalitu del(5q). Zatiaľ čo MDS92 obsahovala heterogénnu zmes myeloidných buniek v rôznych štádiách diferenciácie, MDS-L predstavuje blastickú podlíniu s jednotnejšími charakteristikami nezrelých myeloidných progenitorových buniek. MDS-L si zachováva závislosť od interleukínu-3 (IL-3) pre proliferáciu in vitro, čo odzrkadľuje citlivosť na cytokíny pozorovanú v primárnych progenitorových bunkách MDS. Línia obsahuje viacero genetických zmien, vrátane homozygotných mutácií TP53 a ďalších získaných mutácií v NRAS a CEBPA. Tieto zmeny spoločne odzrkadľujú klonálnu evolúciu a potenciál leukemickej transformácie typický pre MDS s vysokým rizikom.

MDS-L sa široko používa ako model na skúmanie molekulárnych mechanizmov, ktoré sú základom patogenézy MDS, diferenciácie a terapeutickej rezistencie. Jedným z významných zistení pri použití MDS-L bolo preukázanie, že vynútená expresia receptora granulocytového kolóniestimulujúceho faktora (G-CSFR) prostredníctvom retrovirálnej transdukcie umožnila granulocytovú diferenciáciu po stimulácii G-CSF. To bolo dokázané morfologickými zmenami, zvýšenou expresiou CD11b a zvýšenou redukčnou aktivitou nitroblue tetrazolium (NBT), čo svedčí o terminálnom dozrievaní granulocytov. Tieto výsledky odhalili vnútornú schopnosť MDS-L diferencovať sa, ak sú obnovené vhodné signálne komponenty, čo poskytuje pohľad na potenciálne prístupy génovej terapie zamerané na defekty diferenciácie v MDS.

Okrem genetických a funkčných štúdií bol MDS-L dôležitý pri charakterizovaní úlohy modifikácií histónov v progresi ochorenia. Zaujímavé je, že mutácia histónu H3-K27M, ktorá sa bežne spája s pediatrickými gliómami, ale je zriedkavá v hematologických malignitách, bola identifikovaná v MDS-L a zistilo sa, že inhibuje metyláciu histónov sprostredkovanú EZH2. Táto epigenetická zmena viedla k rozsiahlemu zníženiu metylácie H3-K27 a bola spojená so zmenenou expresiou tumor supresorových génov, ako je p16. Podlínie MDS-L s touto mutáciou alebo bez nej, získané prostredníctvom diferencovaných kultivačných podmienok IL-3, ďalej umožnili skúmanie epigenetickej heterogenity v rámci MDS a jej dôsledkov na rast závislý od IL-3 a terapeutickú odpoveď. Tieto jedinečné vlastnosti robia z MDS-L výkonný in vitro a in vivo model na štúdium molekulárnej evolúcie a terapeutického zacielenia MDS a jeho transformácie na akútnu myeloidnú leukémiu.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

V spoločnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopnosťou našich produktov. Garantujeme, že naše bunky budú životaschopné na začiatku kultivácie počas 60 dní po odoslaní z našich zariadení. Zaručujeme, že všetky materiály zodpovedajú špecifikáciám opísaným v certifikáte analýzy a/alebo v produktovom liste

Úplné informácie nájdete v našom <a href=""/Kto sme/záruka/"" hreflang=""x-default"">Vyhlásení o záruke