MDS-L

MDS-L è una linea cellulare derivata dalla sindrome mielodisplastica umana (MDS), originariamente creata dalla linea cellulare MDS92, a sua volta derivata dal midollo osseo di un paziente affetto da MDS che presentava un'anomalia cromosomica del(5q). Mentre MDS92 conteneva un mix eterogeneo di cellule mieloidi in vari stadi di differenziazione, MDS-L rappresenta una sottolinia blastica con caratteristiche più uniformi tipiche delle cellule progenitrici mieloidi immature. MDS-L mantiene la dipendenza dall'interleuchina-3 (IL-3) per la proliferazione in vitro, rispecchiando la sensibilità alle citochine osservata nelle cellule progenitrici MDS primarie. La linea presenta molteplici alterazioni genetiche, tra cui mutazioni omozigoti TP53 e ulteriori mutazioni acquisite in NRAS e CEBPA. Queste alterazioni riflettono collettivamente l'evoluzione clonale e il potenziale di trasformazione leucemica tipici della MDS ad alto rischio.

L'MDS-L è stato ampiamente utilizzato come modello per studiare i meccanismi molecolari alla base della patogenesi dell'MDS, del blocco della differenziazione e della resistenza terapeutica. Una scoperta significativa ottenuta utilizzando l'MDS-L è stata la dimostrazione che l'espressione forzata del recettore del fattore stimolante le colonie di granulociti (G-CSFR) tramite trasduzione retrovirale ha consentito la differenziazione granulocitica in seguito alla stimolazione con G-CSF. Ciò è stato evidenziato da cambiamenti morfologici, aumento dell'espressione di CD11b e aumento dell'attività di riduzione del nitroblu tetrazolio (NBT), indicativa della maturazione terminale dei granulociti. Questi risultati hanno rivelato la capacità intrinseca dell'MDS-L di differenziarsi se vengono ripristinati i componenti di segnalazione appropriati, offrendo spunti di riflessione su potenziali approcci di terapia genica mirati ai difetti di differenziazione nell'MDS.

Oltre agli studi genetici e funzionali, MDS-L è stato fondamentale per caratterizzare il ruolo delle modificazioni degli istoni nella progressione della malattia. In particolare, la mutazione dell'istone H3-K27M, comunemente associata ai gliomi pediatrici ma rara nelle neoplasie ematologiche, è stata identificata nell'MDS-L e si è scoperto che inibisce la metilazione dell'istone mediata da EZH2. Questa alterazione epigenetica ha portato a una riduzione diffusa della metilazione di H3-K27 ed è stata collegata all'alterazione dell'espressione di geni oncosoppressori come p16. Le sottolinee MDS-L con o senza questa mutazione, derivate da condizioni di coltura IL-3 differenziali, hanno consentito un'ulteriore esplorazione dell'eterogeneità epigenetica all'interno della MDS e delle sue implicazioni per la crescita IL-3-dipendente e la risposta terapeutica. Queste proprietà uniche rendono la MDS-L un potente modello in vitro e in vivo per lo studio dell'evoluzione molecolare e del targeting terapeutico della MDS e della sua trasformazione in leucemia mieloide acuta.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia