MDS-L

MDS-L on inimese müelodüsplastilisest sündroomist (MDS) pärinev rakuliin, mis on algselt loodud MDS92 rakuliinist, mis omakorda pärineb MDS-i ja del(5q) kromosoomianomaaliaga patsiendi luuüdist. Kui MDS92 sisaldas heterogeenset segu erinevates diferentseerumisstaadiumites olevatest müeloidrakkudest, siis MDS-L esindab blastilist alaliini, millel on ühtlasemad omadused, mis on iseloomulikud ebaküpsetele müeloidrakkude eellastele. MDS-L säilitab interleukiin-3 (IL-3) sõltuvuse proliferatsiooniks in vitro, peegeldades tsütokiinide tundlikkust, mida on täheldatud primaarse MDS eellastrakkudes. Liin sisaldab mitmeid geneetilisi muutusi, sealhulgas homosügootseid TP53 mutatsioone ja täiendavaid omandatud mutatsioone NRAS-is ja CEBPA-s. Need muutused peegeldavad kokkuvõttes kloonilist evolutsiooni ja leukeemilise transformatsiooni potentsiaali, mis on tüüpiline kõrge riskiga MDS-ile.

MDS-L-i on laialdaselt kasutatud mudelina MDS-i patogeneesi, diferentseerumise blokeerumise ja ravimresistentsuse molekulaarmehhanismide uurimiseks. Üks oluline MDS-L-i kasutamisel tehtud avastus oli tõestus, et granulotsüütide kolooniat stimuleeriva faktori retseptori (G-CSFR) sundekspressioon retroviirusliku transduktsiooni kaudu võimaldas granulotsüütide diferentseerumist G-CSF stimuleerimisel. Seda tõendasid morfoloogilised muutused, CD11b ekspressiooni suurenemine ja nitroblue tetrazoliumi (NBT) redutseerimisaktiivsuse suurenemine, mis viitab granulotsüütide lõplikule küpsemisele. Need tulemused näitasid MDS-L sisemist võimet diferentseeruda, kui taastatakse sobivad signaalikomponendid, pakkudes teadmisi potentsiaalsete geeniteraapia lähenemisviiside kohta, mis on suunatud MDS-i diferentseerumisdefektidele.

Lisaks geneetilistele ja funktsionaalsetele uuringutele on MDS-L olnud oluline histooni modifikatsioonide rolli iseloomustamisel haiguse progresseerumisel. Tähelepanuväärne on, et histooni H3-K27M mutatsioon, mis on tavaliselt seotud laste glioomidega, kuid haruldane hematoloogiliste pahaloomuliste kasvajate puhul, identifitseeriti MDS-L-is ja leiti, et see pärsib EZH2-vahendatud histooni metülatsiooni. See epigeneetiline muutus viis H3-K27 metülatsiooni laialdasele vähenemisele ja oli seotud muutunud ekspressiooniga kasvajavastaste geenide, nagu p16, puhul. MDS-L alaliinid, millel on või ei ole seda mutatsiooni, mis on saadud diferentsiaalsete IL-3 kultiveerimistingimuste kaudu, on võimaldanud täiendavalt uurida epigeneetilist heterogeensust MDS-is ja selle mõju IL-3-sõltuvale kasvule ja ravivastusele. Need unikaalsed omadused muudavad MDS-L-i võimsaks in vitro ja in vivo mudeliks MDS-i molekulaarse evolutsiooni ja ravi sihtmärkide uurimiseks ning selle muutumiseks ägedaks müeloidseks leukeemiaks.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest