GT1-7

GT1-7 هو سلالة فرعية مستنسخة من الخلايا العصبية المهادية الفئرانية الخالدة التي تقوم بتخليق وإفراز هرمون إفراز الغدد التناسلية (GnRH)، المعروف أيضًا باسم هرمون إفراز الهرمون اللوتيني (LHRH). تم تطوير هذه الخلايا من خلال تكوين أورام مستهدفة وراثيًا باستخدام نموذج فئران معدلة وراثيًا تم فيه التعبير عن مستضد T الكبير SV40 تحت سيطرة محفز جين GnRH. أسفرت هذه الاستراتيجية عن أورام في منطقة ما تحت المهاد تم اشتقاق عدة سلالات خلوية مفرزة لهرمون GnRH منها، بما في ذلك GT1-1 و GT1-3 و GT1-7. تُظهر خلايا GT1-7 نمطًا عصبيًا متمايزًا، بما في ذلك التعبير عن علامات خاصة بالخلايا العصبية مثل بروتينات النيوروفيلامنت، وإنزيم إنولاز الخاص بالخلايا العصبية، والبروتينات المرتبطة بالحويصلات المشبكية (VAMP-2، SNAP-25)، والكروموغرانين B. وهي لا تعبر عن علامات الخلايا الدبقية مثل GFAP أو بروتينات المايلين، مما يؤكد هويتها العصبية.

وظيفيًا، تعبر خلايا GT1-7 عن mRNA GnRH الداخلي وتفرز GnRH في نمط متقطع. وهي تمتلك الآلية الكاملة لتحويل pro-GnRH إلى GnRH ناضج وحيوي، بما في ذلك الإنزيمات الداخلية المطلوبة، والكاربوكسي ببتيدات، والإنزيمات الأميدية. تفرز هذه الخلايا أيضًا الببتيد المرتبط بـ GnRH (GAP)، وهو منتج ثانوي لمعالجة pro-GnRH. كشفت الخصائص الكيميائية الحيوية عن أشكال جزيئية متعددة لكل من pro-GnRH و GnRH الناضج داخل خلايا GT1-7 وفي وسط الاستزراع، مما يشير إلى معالجة نشطة بعد الترجمة. GnRH الذي يفرزه GT1-7 نشط بيولوجيًا، وقادر على تحفيز إفراز LH من خلايا الغدة النخامية الأمامية في المختبر.

تُظهر خلايا GT1-7 نشاطًا هجريًا منخفضًا في المختبر، على عكس سلالات خلايا GnRH الأخرى مثل GN11، التي مشتقة من خلايا عصبية GnRH هجرية غير ناضجة من الناحية التنموية. تعتبر خلايا GT1-7 ممثلة للخلايا العصبية GnRH المهاجرة في منطقة ما تحت المهاد وتشكل مستعمرات متصلة بإحكام ومرتبطة بالخلايا العصبية في المزرعة. إن افتقارها للحركة، إلى جانب سماتها العصبية الناضجة واستجابتها للعوامل التنظيمية، يجعلها نموذجًا قويًا لدراسة تنظيم الجينات والتحكم في النمو وعلم وظائف الأعضاء الإفرازية للخلايا العصبية GnRH في منطقة ما تحت المهاد.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان