GT1-7

GT1-7 er en klonal sublinje av immortalisert musehypotalamusneuroner som syntetiserer og utskiller gonadotropinfrigivende hormon (GnRH), også kjent som luteiniserende hormonfrigivende hormon (LHRH). Disse cellene ble utviklet gjennom genetisk målrettet tumorigenese ved hjelp av en transgen musemodell der SV40 stort T-antigen ble uttrykt under kontroll av GnRH-genpromotoren. Denne strategien resulterte i hypotalamiske svulster hvorfra flere GnRH-sekreterende cellelinjer ble avledet, inkludert GT1-1, GT1-3 og GT1-7. GT1-7-celler viser en differensiert nevronfenotype, inkludert uttrykk av nevronspesifikke markører som nevrofilamentproteiner, nevronspesifikk enolase, synaptiske vesikkelassosierte proteiner (VAMP-2, SNAP-25) og kromogranin B. De uttrykker ikke glialmarkører som GFAP eller myelinproteiner, noe som bekrefter deres nevronidentitet.

Funksjonelt uttrykker GT1-7-celler endogent GnRH-mRNA og utskiller GnRH i et episodisk mønster. De har hele prosesseringsmekanismen for å omdanne pro-GnRH til modent, bioaktivt GnRH, inkludert de nødvendige endopeptidaser, karboksypeptidaser og amidaterende enzymer. Disse cellene utskiller også GnRH-assosiert peptid (GAP), et biprodukt av pro-GnRH-prosessering. Biokjemisk karakterisering har avdekket flere molekylære former av både pro-GnRH og modent GnRH i GT1-7-celler og i dyrkningsmediet, noe som indikerer aktiv posttranslasjonell prosessering. GnRH som utskilles av GT1-7 er biologisk aktivt og kan stimulere LH-frigjøring fra hypofyseceller in vitro.

GT1-7-celler viser lav migrasjonsaktivitet in vitro, i motsetning til andre GnRH-cellelinjer som GN11, som stammer fra mer utviklingsmessig umodne, migrerende GnRH-nevroner. GT1-7-celler anses å være representative for postmigrerende, hypothalamiske GnRH-neuroner og danner tett forbundne, nevrittkoblede kolonier i kultur. Deres manglende bevegelighet, kombinert med modne nevronale egenskaper og respons på regulatoriske faktorer, gjør dem til en kraftig modell for å studere genregulering, utviklingskontroll og sekretorisk fysiologi hos hypothalamiske GnRH-neuroner.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring