GT1-7

GT1-7 es una sublínea clonal de neuronas hipotalámicas de ratón inmortalizadas que sintetizan y secretan la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH), también conocida como hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH). Estas células se desarrollaron mediante tumorigénesis dirigida genéticamente utilizando un modelo de ratón transgénico en el que se expresaba el antígeno T grande del SV40 bajo el control del promotor del gen de la GnRH. Esta estrategia dio lugar a tumores hipotalámicos de los que se derivaron varias líneas celulares secretoras de GnRH, entre ellas GT1-1, GT1-3 y GT1-7. Las células GT1-7 presentan un fenotipo neuronal diferenciado, que incluye la expresión de marcadores específicos de las neuronas, como las proteínas de neurofilamentos, la enolasa específica de las neuronas, las proteínas asociadas a las vesículas sinápticas (VAMP-2, SNAP-25) y la cromogranina B. No expresan marcadores gliales como la GFAP o las proteínas de la mielina, lo que confirma su identidad neuronal.

Funcionalmente, las células GT1-7 expresan ARNm endógeno de GnRH y secretan GnRH de manera episódica. Cuentan con todo el mecanismo de procesamiento necesario para convertir la pro-GnRH en GnRH madura y bioactiva, incluyendo las endopeptidasas, carboxipeptidasas y enzimas amidantes requeridas. Estas células también secretan el péptido asociado a la GnRH (GAP), un subproducto del procesamiento de la pro-GnRH. La caracterización bioquímica ha revelado múltiples formas moleculares tanto de la pro-GnRH como de la GnRH madura dentro de las células GT1-7 y en el medio de cultivo, lo que indica un procesamiento postraduccional activo. La GnRH secretada por las células GT1-7 es biológicamente activa, capaz de estimular la liberación de LH por parte de las células de la hipófisis anterior in vitro.

Las células GT1-7 muestran una baja actividad migratoria in vitro, a diferencia de otras líneas celulares de GnRH, como la GN11, que se derivan de neuronas de GnRH migratorias y más inmaduras desde el punto de vista del desarrollo. Las células GT1-7 se consideran representativas de las neuronas de GnRH hipotalámicas posmigratorias y forman colonias estrechamente conectadas y unidas por neuritas en cultivo. Su falta de motilidad, junto con sus rasgos neuronales maduros y su capacidad de respuesta a factores reguladores, las convierte en un modelo poderoso para estudiar la regulación génica, el control del desarrollo y la fisiología secretora de las neuronas hipotalámicas de GnRH.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.