GT1-7

GT1-7は、性腺刺激ホルモン放出ホルモン（GnRH、黄体形成ホルモン放出ホルモン（LHRH）としても知られる）を合成・分泌する不死化マウス視床下部ニューロンのクローン亜株である。これらの細胞は、GnRH遺伝子プロモーターの制御下でSV40大型T抗原が発現するトランスジェニックマウスモデルを用いた遺伝子標的腫瘍形成により開発された。 この戦略により視床下部腫瘍が生じ、そこからGT1-1、GT1-3、GT1-7を含む複数のGnRH分泌細胞株が樹立された。 GT1-7細胞は神経特異的マーカー（神経フィラメントタンパク質、ニューロン特異的エノラーゼ、シナプス小胞関連タンパク質（VAMP-2、SNAP-25）、クロモグラニンBなど）の発現を含む分化した神経細胞様表現型を示す。グリア細胞マーカー（GFAPやミエリンタンパク質など）を発現せず、神経細胞としての同定を確認している。

機能的には、GT1-7細胞は内因性GnRH mRNAを発現し、断続的なパターンでGnRHを分泌する。プロGnRHを成熟した生物活性型GnRHへ変換するための完全な処理機構（必要なエンドペプチダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、アミド化酵素を含む）を有している。これらの細胞はまた、プロGnRH処理の副産物であるGnRH関連ペプチド（GAP）を分泌する。 生化学的特性解析により、GT1-7細胞内および培養液中にプロGnRHと成熟GnRHの複数の分子形態が存在することが明らかになり、活発な翻訳後処理が示唆された。GT1-7細胞が分泌するGnRHは生物学的に活性であり、in vitroで前葉下垂体細胞からのLH放出を刺激する能力を有している。

GT1-7細胞はin vitroで低い遊走活性を示すが、これはより未分化で遊走能を有するGnRHニューロン由来のGN11などの他のGnRH細胞株とは対照的である。 GT1-7細胞は遊走後の視床下部GnRHニューロンを代表すると考えられており、培養では神経突起で連結された密接なコロニーを形成する。運動性の欠如と成熟した神経細胞の特性、および調節因子への応答性を併せ持つことから、視床下部GnRHニューロンの遺伝子調節、発達制御、分泌生理学を研究する強力なモデルとなっている。

37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

サイシオンは、製品の品質と生存率を保証します。 当社では、培養を開始した時点で、当社施設からの出荷後60日間、細胞が生存可能であることを保証しています。 すべての材料が、分析証明書および／または製品シートに記載された仕様に適合していることを保証します。

詳細については、<a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Warranty Statement をご参照ください。