GT1-7

GT1-7 เป็นสายพันธุ์ย่อยโคลนของเซลล์ประสาทไฮโปทาลามัสของหนูที่ถูกทำให้เป็นอมตะซึ่งสังเคราะห์และหลั่งฮอร์โมนกระตุ้นการหลั่งฮอร์โมนเพศ (GnRH) หรือที่รู้จักในชื่อฮอร์โมนกระตุ้นการหลั่งฮอร์โมนลูทีไนซิง (LHRH) เซลล์เหล่านี้ถูกพัฒนาผ่านการก่อเนื้องอกแบบกำหนดเป้าหมายทางพันธุกรรมโดยใช้แบบจำลองหนูทรานส์เจเนติกซึ่งมีการแสดงออกของ SV40 large T-antigen ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ของยีน GnRH กลยุทธ์นี้ส่งผลให้เกิดเนื้องอกในไฮโปทาลามัส ซึ่งต่อมาได้ถูกนำมาพัฒนาเป็นเซลล์ไลน์ที่หลั่ง GnRH หลายชนิด รวมถึง GT1-1, GT1-3 และ GT1-7 เซลล์ GT1-7 แสดงลักษณะเฉพาะของเซลล์ประสาทที่แตกต่างอย่างชัดเจน รวมถึงการแสดงออกของเครื่องหมายเฉพาะของเซลล์ประสาท เช่น โปรตีน neurofilament, neuron-specific enolase, โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับถุงเก็บสารสื่อประสาท (VAMP-2, SNAP-25) และ chromogranin B โดยไม่แสดงเครื่องหมายของเซลล์เกลีย เช่น GFAP หรือโปรตีนไมอีลิน ซึ่งยืนยันถึงเอกลักษณ์ของเซลล์ประสาท

ในเชิงหน้าที่ เซลล์ GT1-7 แสดงออกของ mRNA ของ GnRH ภายในตัวเองและหลั่ง GnRH ในรูปแบบเป็นช่วงๆ พวกมันมีเครื่องจักรการประมวลผลที่สมบูรณ์เพื่อเปลี่ยน pro-GnRH ให้เป็น GnRH ที่สมบูรณ์และมีฤทธิ์ทางชีวภาพ รวมถึงเอนไซม์ endopeptidases, carboxypeptidases และเอนไซม์ amidating ที่จำเป็น เซลล์เหล่านี้ยังหลั่ง peptide ที่เกี่ยวข้องกับ GnRH (GAP) ซึ่งเป็นผลพลอยได้จากการประมวลผล pro-GnRH การวิเคราะห์ทางชีวเคมีได้เปิดเผยให้เห็นรูปแบบโมเลกุลหลายรูปแบบของโปร-GnRH และ GnRH ที่สมบูรณ์ภายในเซลล์ GT1-7 และในอาหารเลี้ยงเซลล์ ซึ่งบ่งชี้ถึงการประมวลผลหลังการแปลรหัสที่ยังคงเกิดขึ้นอย่างต่อเนื่อง GnRH ที่ถูกหลั่งโดยเซลล์ GT1-7 มีฤทธิ์ทางชีวภาพ สามารถกระตุ้นการหลั่ง LH จากเซลล์ต่อมใต้สมองส่วนหน้าในหลอดทดลองได้

เซลล์ GT1-7 แสดงกิจกรรมการเคลื่อนที่ต่ำในหลอดทดลอง ซึ่งแตกต่างจากเซลล์สายพันธุ์ GnRH อื่น ๆ เช่น GN11 ที่มาจากเซลล์ประสาท GnRH ที่ยังไม่เจริญเติบโตเต็มที่และมีการเคลื่อนที่มากกว่า เซลล์ GT1-7 ถือเป็นตัวแทนของเซลล์ประสาท GnRH ในสมองส่วนไฮโปทาลามัสหลังการอพยพ และสร้างกลุ่มเซลล์ที่เชื่อมต่อกันอย่างแน่นหนาโดยมีเส้นใยประสาทเชื่อมโยงกันในวัฒนธรรมการเพาะเลี้ยง การขาดการเคลื่อนไหวของเซลล์เหล่านี้ ประกอบกับลักษณะของเซลล์ประสาทที่เจริญเต็มที่และการตอบสนองต่อปัจจัยควบคุม ทำให้เซลล์เหล่านี้เป็นแบบจำลองที่มีประสิทธิภาพสำหรับการศึกษาการควบคุมยีน การควบคุมการพัฒนา และสรีรวิทยาของการหลั่งของเซลล์ประสาท GnRH ในสมองส่วนไฮโปทาลามัส

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.