GT1-7

GT1-7 to klonalna podlinia nieśmiertelnych neuronów podwzgórza myszy, które syntetyzują i wydzielają hormon uwalniający gonadotropinę (GnRH), znany również jako hormon uwalniający hormon luteinizujący (LHRH). Komórki te zostały opracowane poprzez genetycznie ukierunkowaną tumorigenezę z wykorzystaniem transgenicznych modeli myszy, w których duży antygen T SV40 był wyrażany pod kontrolą promotora genu GnRH. Strategia ta doprowadziła do powstania guzów podwzgórza, z których wyhodowano kilka linii komórkowych wydzielających GnRH, w tym GT1-1, GT1-3 i GT1-7. Komórki GT1-7 wykazują zróżnicowany fenotyp neuronalny, w tym ekspresję markerów specyficznych dla neuronów, takich jak białka neurofilamentowe, enolaza specyficzna dla neuronów, białka związane z pęcherzykami synaptycznymi (VAMP-2, SNAP-25) i chromogranina B. Nie wykazują one ekspresji markerów gleju, takich jak GFAP lub białka mieliny, co potwierdza ich tożsamość neuronalną.

Pod względem funkcjonalnym komórki GT1-7 wykazują ekspresję endogennego mRNA GnRH i wydzielają GnRH w sposób epizodyczny. Posiadają one pełen aparat przetwarzający, umożliwiający przekształcenie pro-GnRH w dojrzały, bioaktywny GnRH, w tym niezbędne endopeptydazy, karboksypeptydazy i enzymy amidujące. Komórki te wydzielają również peptyd związany z GnRH (GAP), produkt uboczny przetwarzania pro-GnRH. Charakterystyka biochemiczna ujawniła wiele form molekularnych zarówno pro-GnRH, jak i dojrzałego GnRH w komórkach GT1-7 i w pożywce hodowlanej, co wskazuje na aktywne przetwarzanie potranslacyjne. GnRH wydzielane przez GT1-7 jest biologicznie aktywne i zdolne do stymulowania uwalniania LH z komórek przedniego płata przysadki mózgowej in vitro.

Komórki GT1-7 wykazują niską aktywność migracyjną in vitro, w przeciwieństwie do innych linii komórkowych GnRH, takich jak GN11, które pochodzą z bardziej niedojrzałych rozwojowo, migrujących neuronów GnRH. Komórki GT1-7 są uważane za reprezentatywne dla postmigracyjnych neuronów GnRH podwzgórza i tworzą w hodowli ściśle połączone kolonie połączone neurytami. Ich brak ruchliwości w połączeniu z dojrzałymi cechami neuronalnymi i reaktywnością na czynniki regulacyjne sprawia, że są one potężnym modelem do badania regulacji genów, kontroli rozwoju i fizjologii wydzielania neuronów GnRH podwzgórza.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym