GT1-7

GT1-7 je klonska podvrsta nesmrnih hipotalamičnih nevronov miši, ki sintetizirajo in izločajo gonadotropin sproščajoči hormon (GnRH), znan tudi kot luteinizirajoči hormon sproščajoči hormon (LHRH). Te celice so bile razvite z genetsko usmerjeno tumorigenozo z uporabo transgenega mišjega modela, v katerem je bil velik T-antigen SV40 izražen pod nadzorom promotorja gena GnRH. Ta strategija je povzročila hipotalamske tumorje, iz katerih je bilo pridobljenih več celičnih linij, ki izločajo GnRH, vključno z GT1-1, GT1-3 in GT1-7. Celice GT1-7 kažejo diferenciran nevronski fenotip, vključno z izražanjem nevronsko specifičnih markerjev, kot so nevrofilamentne beljakovine, nevronsko specifična enolaza, beljakovine, povezane s sinaptičnimi vezikuli (VAMP-2, SNAP-25), in kromogranin B. Ne izražajo glialnih markerjev, kot so GFAP ali mielinske beljakovine, kar potrjuje njihovo nevronsko identiteto.

Funkcionalno celice GT1-7 izražajo endogeni GnRH mRNA in izločajo GnRH v epizodnem vzorcu. Imajo celoten procesni mehanizem za pretvorbo pro-GnRH v zreli, bioaktiven GnRH, vključno z zahtevanimi endopeptidazami, karboksipeptidazami in amidirajočimi encimi. Te celice izločajo tudi peptid, povezan z GnRH (GAP), stranski produkt procesiranja pro-GnRH. Biokemična karakterizacija je razkrila več molekularnih oblik pro-GnRH in zrelega GnRH v GT1-7 celicah in v kultivnem mediju, kar kaže na aktivno posttranslacijsko predelavo. GnRH, ki ga izloča GT1-7, je biološko aktiven in lahko stimulira sproščanje LH iz anteriornih hipofiznih celic in vitro.

GT1-7 celice kažejo nizko migracijsko aktivnost in vitro, v nasprotju z drugimi GnRH celičnimi linijami, kot je GN11, ki izhajajo iz razvojno nezrelih, migracijskih GnRH nevronov. GT1-7 celice veljajo za reprezentativne za postmigracijske hipotalamične GnRH nevrone in v kulturi tvorijo tesno povezane kolonije, povezane z nevriti. Njihova pomanjkljiva motilnost, skupaj z zrelimi nevronskimi lastnostmi in odzivnostjo na regulativne faktorje, jih naredi močan model za preučevanje genetske regulacije, razvojnega nadzora in fiziologije izločanja hipotalamičnih GnRH nevronov.

37 °C, 5 %_CO2, vlažno ozračje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

V podjetju Cytion stojimo za kakovostjo in uporabnostjo svojih izdelkov. Zagotavljamo, da bodo naše celice ob začetku gojenja še 60 dni po odpremi iz naših obratov vitalne. Zagotavljamo, da so vsi materiali skladni s specifikacijami, opisanimi v potrdilu o analizi in/ali listu izdelka

Za vse podrobnosti si oglejte našo <a href=""/Kdo smo/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garancijsko izjavo