GT1-7

GT1-7 е клонирана подлиния от безсмъртни хипоталамични неврони на мишки, които синтезират и секретират гонадотропин-освобождаващ хормон (GnRH), известен също като лутеинизиращ хормон-освобождаващ хормон (LHRH). Тези клетки са разработени чрез генетично насочена туморогенеза, използвайки трансгенен миши модел, в който големият Т-антиген SV40 се експресира под контрола на промотора на гена GnRH. Тази стратегия доведе до хипоталамични тумори, от които бяха получени няколко клетъчни линии, секретиращи GnRH, включително GT1-1, GT1-3 и GT1-7. GT1-7 клетките проявяват диференциран невронен фенотип, включително експресия на неврон-специфични маркери като неврофиламентни протеини, неврон-специфична енолаза, протеини, свързани със синаптични везикули (VAMP-2, SNAP-25) и хромогранин B. Те не експресират глиални маркери като GFAP или миелинови протеини, което потвърждава тяхната невронна идентичност.

Функционално, GT1-7 клетките експресират ендогенен GnRH mRNA и секретират GnRH в епизодичен модел. Те притежават пълния механизъм за преобразуване на про-GnRH в зрял, биоактивен GnRH, включително необходимите ендопептидази, карбоксипептидази и амидиращи ензими. Тези клетки също секретират GnRH-асоцииран пептид (GAP), страничен продукт от преработката на про-GnRH. Биохимичната характеристика разкрива множество молекулни форми както на про-GnRH, така и на зрял GnRH в GT1-7 клетките и в културалната среда, което показва активна посттранслационна преработка. GnRH, секретиран от GT1-7, е биологично активен и способен да стимулира освобождаването на LH от клетките на предния хипофизен жлеза in vitro.

GT1-7 клетките проявяват ниска миграционна активност in vitro, за разлика от други GnRH клетъчни линии като GN11, които са получени от по-незрели, миграционни GnRH неврони. GT1-7 клетките се считат за представителни за постмиграционни, хипоталамични GnRH неврони и образуват плътно свързани, свързани с неврити колонии в култура. Липсата им на подвижност, съчетана с зрели невронни характеристики и отзивчивост към регулаторни фактори, ги прави мощен модел за изучаване на генната регулация, контрола на развитието и секреторната физиология на хипоталамичните GnRH неврони.

37°C, 5%_CO2, овлажнена атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

Ние в Cytion заставаме зад качеството и жизнеспособността на нашите продукти. Гарантираме, че нашите клетки ще бъдат жизнеспособни в началото на култивирането в продължение на 60 дни след изпращането им от нашите съоръжения. Гарантираме, че всички материали отговарят на спецификациите, описани в сертификата за анализ и/или продуктовата листа

За пълни подробности, моля, направете справка с нашата <a href=""/Кои сме ние/Гаранция/"" hreflang=""x-default"">Гаранционна декларация