GT1-7

GT1-7 je klonálna podlínička nesmrteľných hypotalamických neurónov myší, ktoré syntetizujú a vylučujú hormón uvoľňujúci gonadotropín (GnRH), známy aj ako hormón uvoľňujúci luteinizačný hormón (LHRH). Tieto bunky boli vyvinuté prostredníctvom geneticky cieleného tumorigenézy s použitím transgenického myšieho modelu, v ktorom bol veľký T-antigén SV40 exprimovaný pod kontrolou promotora génu GnRH. Táto stratégia viedla k vzniku hypotalamických nádorov, z ktorých bolo odvodených niekoľko buniek vylučujúcich GnRH, vrátane GT1-1, GT1-3 a GT1-7. Bunky GT1-7 vykazujú diferencovaný neuronálny fenotyp, vrátane expresie neuronovo-špecifických markerov, ako sú neurofilamentové proteíny, neuronovo-špecifická enoláza, proteíny asociované so synaptickými vezikulami (VAMP-2, SNAP-25) a chromogranín B. Nevyjadrujú gliové markery, ako sú GFAP alebo myelínové proteíny, čo potvrdzuje ich neuronálnu identitu.

Funkčne bunky GT1-7 exprimujú endogénnu GnRH mRNA a vylučujú GnRH v epizodickom vzore. Disponujú kompletným spracovateľským mechanizmom na konverziu pro-GnRH na zrelý, bioaktívny GnRH, vrátane potrebných endopeptidáz, karboxypeptidáz a amidovacích enzýmov. Tieto bunky tiež vylučujú peptid asociovaný s GnRH (GAP), vedľajší produkt spracovania pro-GnRH. Biochemická charakterizácia odhalila viacero molekulárnych foriem pro-GnRH aj zrelého GnRH v bunkách GT1-7 a v kultivačnom médiu, čo naznačuje aktívne posttranslačné spracovanie. GnRH vylučovaný GT1-7 je biologicky aktívny a schopný stimulovať uvoľňovanie LH z buniek predného hypofýzy in vitro.

Bunky GT1-7 vykazujú nízku migračnú aktivitu in vitro, čo je v kontraste s inými bunkovými líniami GnRH, ako je GN11, ktoré pochádzajú z vývojovo nezrelých, migrujúcich neurónov GnRH. Bunky GT1-7 sa považujú za reprezentatívne pre postmigračné hypotalamické neuróny GnRH a v kultúre tvoria tesne prepojené kolónie spojené neuritmi. Ich nedostatok pohyblivosti v spojení so zrelými neurónovými vlastnosťami a citlivosťou na regulačné faktory z nich robí výkonný model na štúdium génovej regulácie, kontroly vývoja a sekrečnej fyziológie hypotalamických neurónov GnRH.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

V spoločnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopnosťou našich produktov. Garantujeme, že naše bunky budú životaschopné na začiatku kultivácie počas 60 dní po odoslaní z našich zariadení. Zaručujeme, že všetky materiály zodpovedajú špecifikáciám opísaným v certifikáte analýzy a/alebo v produktovom liste

Úplné informácie nájdete v našom <a href=""/Kto sme/záruka/"" hreflang=""x-default"">Vyhlásení o záruke