GT1-7

GT1-7 on kloonitud alamliin surematutest hiire hüpotalamuse neuronitest, mis sünteesivad ja eritavad gonadotropiini vabastavat hormooni (GnRH), tuntud ka kui luteiniseerivat hormooni vabastavat hormooni (LHRH). Need rakud arendati geneetiliselt suunatud tumorigeense kaudu, kasutades transgeenset hiire mudelit, milles SV40 suur T-antigeen ekspresseeriti GnRH geeni promootori kontrolli all. Selle strateegia tulemusena tekkisid hüpotalamuse kasvajad, millest saadi mitu GnRH-d eritavat rakuliini, sealhulgas GT1-1, GT1-3 ja GT1-7. GT1-7 rakud näitavad diferentseeritud neuronaalset fenotüüpi, sealhulgas neuroni-spetsiifiliste markerite ekspressiooni, nagu neurofilamentvalkud, neuroni-spetsiifiline enolaas, sünaptiliste vesikulitega seotud valgud (VAMP-2, SNAP-25) ja kromograniin B. Nad ei ekspressi gliaalsete markerite, nagu GFAP või müeliinivalkude, kinnitades oma neuronaalset identiteeti.

Funktsionaalselt ekspresseerivad GT1-7 rakud endogeenset GnRH mRNA-d ja eritavad GnRH-d episoodiliselt. Neil on täielik töötlemismehhanism pro-GnRH muutmiseks küpseteks, bioaktiivseteks GnRH-deks, sealhulgas vajalikud endopeptidaasid, karboksüpeptidaasid ja amidifitseerivad ensüümid. Need rakud eritavad ka GnRH-ga seotud peptiidi (GAP), mis on pro-GnRH töötlemise kõrvalsaadus. Biokeemiline iseloomustus on näidanud pro-GnRH ja küpsenud GnRH mitmeid molekulaarseid vorme GT1-7 rakkudes ja kultuurikeskkonnas, mis viitab aktiivse posttranslatsioonilisele töötlemisele. GT1-7 poolt eritatud GnRH on bioloogiliselt aktiivne ja suudab stimuleerida LH vabanemist eesmise hüpofüüsi rakkudest in vitro.

GT1-7 rakud näitavad in vitro madalat rändevõimet, mis on vastandiks teistele GnRH rakuliinidele, nagu GN11, mis on saadud arenguliselt ebaküpsematest, rändavatest GnRH neuronitest. GT1-7 rakke peetakse postmigratsiooniliste hüpotalamuse GnRH neuronite esindajateks ja need moodustavad kultuuris tihedalt seotud, neuritidega ühendatud kolooniad. Nende liikuvuse puudumine koos küpsete neuronite omaduste ja regulatoorsete faktorite suhtes reageerimisvõimega teeb neist võimsa mudeli hüpotalamuse GnRH neuronite geeniregulatsiooni, arengukontrolli ja sekretsioonifüsioloogia uurimiseks.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest